| Heparan Sulfate Identification and Characterisation: Method II. Enzymatic Depolymerisation and SAX-HPLC Analysis to Determine Disaccharide Composition
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] Heparan sulfate (HS) is purified from complex matrices and often not fully characterised to validate its assignment. The characterisation of heparins and heparan sulfates through enzymatic depolymerisation and subsequent strong anion-exchange high performance liquid chromatography (SAX-HPLC) analysis and quantitation of the resulting disaccharides is a critical tool for assessing the structural composition of this class of compound. This protocol details a methodology to reproducibly determine the disaccharide composition of heparan sulfate by enzymatic depolymerisation and SAX-HPLC analysis. A complementary method for identification and characterisation of heparan sulfate can be found at Carnachan and Hinkley (2017).
[摘要] 从复杂基质中纯化硫酸肝素（HS），并且通常没有完全表征以验证其分配。 通过酶促解聚和随后的强阴离子交换高效液相色谱（SAX-HPLC）分析和定量所得二糖来描述肝素和硫酸乙酰肝素是评估该类化合物的结构组成的关键工具。 该方案详述了通过酶促解聚和SAX-HPLC分析可重复地确定硫酸乙酰肝素的二糖组成的方法。 Carnachan和Hinkley（2017）可以找到一种用于硫酸乙酰肝素鉴定和表征的补充方法。
肝素和HS的结构分析存在一些方法。 该方案旨在为肝素和HS的酶解解提供优化的方法，并分析和定量其中产生的二糖。 非常少的公开分析考虑了总组合物的所有方面，包括解聚程度与获得的二糖组合的结合（Skidmore等人，2006和2010; Carnachan等人。，2016）。 当样品随后用于总是剂量依赖性的生物测定中时，这尤其令人担忧。 本文描述的酶程序是研究调查最佳酶活性和HS解聚所需条件的详细研究的最终结果（Carnachan等人，2016）。 该程序旨在提供适用于没有经验的糖胺聚糖（GAG）分析的实验室的逐步方案。
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| Mouse Model of Reversible Intestinal Inflammation
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Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract] Current therapies to treat inflammatory bowel disease by dampening excessive inflammatory immune responses have had limited success (Reinisch et al., 2011; Rutgeerts et al., 2005; Sandborn et al., 2012). To develop new therapeutic interventions, there is a need for better understanding of the mechanisms that are operative during mucosal healing (Pineton de Chambrun et al., 2010). To this end, a reversible model of colitis was developed in which colitis induced by adoptive transfer of naïve CD4+ CD45RBhi T cells in lymphopenic mice can be reversed through depletion of colitogenic CD4+ T cells (Brasseit et al., 2016).
[摘要] 目前通过抑制过度炎症免疫应答治疗炎症性肠病的治疗方法取得了有限的成功（Reinisch等人，2011; Rutgeerts等人，2005; Sandborn等人[ et al。，2012）。为了开发新的治疗干预措施，需要更好地了解粘膜愈合期间手术的机制（Pineton de Chambrun等，2010）。为此，开发了一种可逆模型的结肠炎，其中通过淋巴细胞小鼠中过早转移原始CD4 + / CD40RB T细胞诱导的结肠炎可以通过消除结肠发生CD4 + T细胞（Brasseit等，2016）。
背景随着发展旨在重现人类疾病的动物模型，我们对肠道炎症性肠疾病（IBD）的发病机制的理解已经大大改善（Khanna等人）。 ，2014）。尽管鉴定了广泛的免疫学目标，目前的治疗方法在治疗IBD方面取得的成功有限，而且有关知识可用于建立长期缓解和相关粘膜愈合时引起的机制（D'Haens >等，，2014）。到目前为止，一个主要的限制是缺乏动物模型，其中可以在具有既定疾病的动物中可再现地诱导缓解。在感染引起肠道炎症的模型中，促炎和抗炎机制可以同时运作，这意味着在解决炎症期间解剖不同免疫途径的作用可能是一个挑战（Endt等人。 ，2010; ...
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| Isolation of Ribosomal Particles from the Unicellular Cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803
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Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract] Isolation of ribosomal particles is an essential step in the study of ribosomal components as well as in the analysis of trans-acting factors that interact with the ribosome to regulate protein synthesis and modulate the expression profile of the cell in response to different environmental conditions. In this protocol, we describe a procedure for the isolation of 70S ribosomes from the unicellular cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 (hereafter Synechocystis). We have successfully used this protocol in our study of the cyanobacterial ribosomal-associated protein LrtA, which is a homologue of bacterial HPF (hibernation promoting factor) (Galmozzi et al., 2016).
[摘要] 核糖体颗粒的分离是研究核糖体组分以及与核糖体相互作用以调节蛋白质合成并调节细胞表达谱的反式因子的分析中必不可少的步骤响应不同的环境条件。在本协议中，我们描述了从单细胞蓝细菌集胞藻分离70S核糖体的过程。 PCC 6803（以下简称集胞藻）。我们已经成功地使用这个方案来研究蓝细菌核糖体相关蛋白LrtA，它是细菌HPF（冬眠促进因子）的同系物（Galmozzi等人，2016）。
背景 据报道蓝藻核糖体几乎没有生物化学研究。已经通过差速离心分离70S核糖体颗粒，然后通过二维电泳分析核糖体蛋白质（Sato et al。，et al。 ，1998）。核糖体也已经从聚球藻（Spechococcus）进行制备。 PCC 6301细胞使用组合差速离心和蔗糖步骤梯度的方案（Sugita等人，2000）。通过差速离心分离细胞提取物也被用于制备核糖体样品用于在不同的聚球藻菌株中开发体外翻译系统（Mutsuda和Sugiura，2006 ）。基于针对聚球藻（Sugita等人，2000）所述的方法，本文所述的针对集胞藻的方法允许使用以下方式纯化核糖体颗粒线性蔗糖梯度的超速离心。
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