| Enhancement of Mucus Production in Eukaryotic Cells and Quantification of Adherent Mucus by ELISA
|
|
Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract] The mucosal surfaces of the gastrointestinal, respiratory, reproductive, and urinary tracts, and the surface of the eye harbor a resident microflora that lives in symbiosis with their host and forms a complex ecosystem. The protection of the vulnerable epithelium is primarily achieved by mucins that form a gel-like structure adherent to the apical cell surface. This mucus layer constitutes a physical and chemical barrier between the microbial flora and the underlying epithelium. Mucus is critical to the maintenance of a homeostatic relationship between the microbiota and its host. Subtle deviations from this dynamic interaction may result in major implications for health. The protocol in this article describes the procedures to grow low mucus-producing HT29 and high mucus-producing ...
[摘要] 胃肠道，呼吸道，生殖道和泌尿道的粘膜表面以及眼睛表面都有一个居住的微生物群落，它们与宿主共生并形成一个复杂的生态系统。脆弱的上皮细胞的保护主要通过形成附着于顶端细胞表面的凝胶样结构的粘蛋白实现。该粘液层构成了微生物菌群和下层上皮之间的物理和化学屏障。粘液对维持微生物群与宿主之间的稳态关系至关重要。与这种动态互动的细微差异可能会对健康产生重大影响。本文中的方案描述了生长低粘液产生HT29和高粘液产生HT29-MTX-E12细胞的程序，维持细胞并通过ELISA将其用于粘液定量。此外，还介绍了如何评估分泌黏液的数量。该系统可用于研究粘液对抗细菌毒素的保护作用，例如测试不同培养条件对粘液产生的影响或分析分子通过粘液层的扩散。由于本方案中使用的ELISA可用于不同的物种和粘液蛋白，因此也可以使用其他细胞类型。
【背景】身体与外部环境的界面由粘膜表面形成。这些粘膜上皮组织可以在例如胃肠道，呼吸道，生殖道和尿道以及眼睛表面发现。由于它们暴露于外部环境中，许多微生物会聚集在这些组织中。因此，这些上皮细胞已经进化出多种防御机制来回应其易受微生物攻击的影响。许多防御性化合物被分泌到粘膜液中，包括粘蛋白，抗体，防御素，protegrin，聚集蛋白，cathelicidins，溶菌酶，组蛋白和一氧化氮（Kagnoff和Eckmann，1997，Lu等人，2002 ...
|
|
|
| Expansion of Airway Basal Cells and Generation of Polarized Epithelium
|
|
Author:
Date:
2018-06-05
[Abstract] Airway basal stem cells are the progenitor cells within the airway that exhibit the capacity to self-renew and give rise to multiple types of differentiated airway epithelial cells. This stem cell-derived epithelium displays organized architecture with functional attributes of the airway mucosa. A protocol has been developed to culture and expand human airway basal stem cells while preserving their stem cell properties and capacity for subsequent mucociliary differentiation. This achievement presents a previously unrealized opportunity to maintain a durable supply of progenitor cells derived from healthy donors to differentiate into human primary airway epithelium for cellular and molecular-based studies. Further, basal stem cells can be harvested from patients with a specific airway ...
[摘要] 气道基底干细胞是气道内的祖细胞，表现出自我更新的能力并产生多种类型的分化的气道上皮细胞。这种干细胞来源的上皮细胞显示出具有气道粘膜功能属性的有组织的结构。已经开发了一种方案来培养和扩展人气道基底干细胞，同时保持其干细胞特性和后续粘液分泌的能力。这项成就提供了一个以前未实现的机会，以保持源自健康供体的祖细胞的持久供应，以分化为用于基于细胞和分子的研究的人原发性气道上皮。此外，基底干细胞可以从患有特定气道疾病的患者（例如囊性纤维化）中收集，从而能够在适当的气道粘膜环境下研究疾病特异性细胞的潜在改变的行为。在这里，我们详细描述了一系列气道基底干细胞系列扩增的方案，以实现几乎无限制的气道基底细胞的生成，这些细胞可以储存并随时用于随后的培养和分化。此外，我们描述了气液基底干细胞在空气 - 液体界面处的可渗透Transwell过滤器上的培养和分化，以创建功能性粘膜睫毛伪分层极化气道上皮粘膜。
【背景】气道疾病建模和药物发现已经从在气液界面（ALI）的可渗透Transwell过滤器上生长的原代呼吸道上皮培养物的开发和使用中获益。与永生化细胞系相比，该模型具有几个优点，即原代上皮细胞可以分化成具有多种上皮细胞类型（包括纤毛，浆膜和基底细胞）的气道粘膜，并且它们的排列在体内是相当反映的蜂窝组织。主要的ALI模型表现出功能性微生理过程，包括跳动纤毛和分泌粘液的能力，这些特征在细胞系衍生的上皮单层中显着不存在。此外，原代细胞不依赖于人工永生化或转化，因为细胞系来源的上皮细胞确实存在，因此不受细胞系中可能发生的错误信号传导的阻碍，这可能会错误地表示气道上皮中发生的过程。尽管有这些显着的限制，永生化细胞系被广泛用于模拟和研究气道上皮细胞，因为原发性气道上皮细胞存在自己的一系列挑战。原代上皮细胞在传代数次后无法复制，必须连续收获并分离以完成每组研究。另外，改变或缺失感兴趣基因表达的分子生物学技术难以实现，并且与原代上皮细胞一起维持。这些缺点造成成本和技术障碍，阻碍了原发性ALI培养物的广泛使用，尽管它们在调查气道粘膜方面有明显优势。 ...
|
|
|