| Lipid Droplet Isolation from Arabidopsis thaliana Leaves
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Author:
Date:
2020-12-20
[Abstract] Lipid droplets (LDs) are neutral lipid aggregates surrounded by a phospholipid monolayer and specific proteins. In plants, they play a key role as energy source after seed germination, but are also formed in vegetative tissues in response to developmental or environmental conditions, where their functions are poorly understood. To elucidate these, it is essential to isolate LDs with good yields, while retaining their protein components. LD isolation protocols are based on their capacity to float after centrifugation in sucrose gradients. Early strategies using stringent conditions and LD-abundant plant tissues produced pure LDs where core proteins were identified. To identify more weakly bound LD proteins, recent protocols have used low stringency buffers, but carryover contaminants and ...
[摘要] [摘要]脂质滴（LDs）是被磷脂单层和特定蛋白质包围的中性脂质聚集体。在植物中，它们在种子发芽后作为能源起着关键作用，但由于发育或环境条件而对其功能了解甚少，它们也在营养组织中形成。为了阐明这些，必须分离出具有高产率的LD，同时保留其蛋白质成分。LD分离方案基于其在蔗糖梯度中离心后的漂浮能力。早期使用严格条件和LD丰富的植物组织的策略产生了可鉴定核心蛋白的纯LD。为了鉴定更弱结合的LD蛋白，最近的研究otocols使用了低严格性的缓冲液，但是残留污染物和低收率通常是个问题。我们已经开发了一种基于蔗糖梯度的方案，可使用Tween-20和新鲜组织从拟南芥叶中分离LD，以提高产量。在健康和细菌感染的拟南芥叶片中，该方案均允许鉴定LD蛋白，随后通过显微镜分析对其进行确认。
背景]脂质降住所（LD）的通过由磷脂单层，其中LD蛋白插入包围的中性脂质核心组成的细胞器（Tzen等人，1993） 。LD首先被描述为稳定的隔室，用于在特殊组织中存储高能脂质。然而，最近的评论将LDs描述为大多数细胞类型中存在的高度动态的细胞器，其功能超越了单纯的能量存储（Shimada等人，2018; Huang，2018; Shao等人，2019）。
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| Isolation and Characterization of Exosomes from Mouse Feces
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Author:
Date:
2020-04-20
[Abstract] Exosomes secreted by colonic epithelial cells are present in feces and contain valuable epigenetic information, such as miRNAs, proteins, and metabolites. An in-depth study of this information is conducive to the diagnosis or treatment of relevant diseases. A crucial prerequisite of such a study is to establish an efficient isolation method, through which we can obtain a relatively more significant amount of exosomes from feces. This protocol is designed to effectively isolate a large number of exosomes from contaminants and other particles in feces by a combined method with fast filtration and sucrose density gradient ultracentrifugation. Exosomes generated by this method are suitable for further RNA, protein, and lipid analysis.
[摘要] [摘要] 外来体分泌的结肠上皮细胞是否存在，在粪便和包含有价值的表观遗传信息，例如miRNA，蛋白质和代谢。一个在深入研究这个信息，有利于诊断和治疗相关疾病的一种重要前提这项研究的目的是建立一种有效的分离方法，通过该方法我们可以从粪便中获得相对大量的外泌体。该方案旨在通过组合方法有效地从粪便中的污染物和其他颗粒中分离出大量外泌体通过快速过滤和蔗糖密度梯度超速离心。这种方法产生的外泌体适用于进一步的RNA，蛋白质和脂质分析。
[背景] 结肠外泌体由结肠上皮细胞分泌到管腔中，并沿大肠转运并存在于粪便中。这些外泌体的脂质双层结构可防止复杂条件下封装的生物分子（如miRNA）的降解（由于粪便）（古贺等人，2011 ; 邓等人，2013 ）。该保护功能外体是非常有用的，因为这些受保护的内容可以用来诊断疾病，如溃疡性结肠炎和结肠癌症。重要的是，重新设计的外泌体也可以有效地将治疗性生物分子递送至某些特定的疾病靶标，而不会对宿主产生免疫毒性（Sun 等人，2010; Johnsen 等人，2014; Wang 等人，2016; Kim和Kim，2018 ）。
迄今为止，已成功地从血液（Wu 等人，2017 ），尿液（Knepper和Pisitkun，2007； Motamedinia 等人，2016 ），培养细胞（Yeo 等人，2013 ...
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