| A Blood-retina Barrier Permeability Assay in Young Mice Using Sulfo-NHS-LC-biotin Perfusion
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Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract] Brain and retinal vasculatures exhibit restricted vascular permeability known as blood-brain barrier and blood-retina barrier. Vascular permeability can be evaluated by perfusion of the amine reactive ester derivatives of biotin such as sulfo-NHS-LC-biotin. This protocol describes experimental procedures of sulfo-NHS-LC-biotin perfusion to evaluate retinal vascular permeability. Perfused sulfo-NHS-LC-biotin remained within vessels in wild-type postnatal day 15 (P15) retinas, confirming an intact blood-retina barrier. In contrast, sulfo-NHS-LC-biotin was occasionally detected in extravascular spaces in perfused Eogt−/− retinas suggesting a partly impaired vascular integrity in the absence of Eogt (Sawaguchi et al., 2017).
[摘要] 脑和视网膜脉管系统表现出受限的血管通透性，称为血脑屏障和血 - 视网膜屏障。 血管通透性可以通过灌注生物素的胺反应性酯衍生物如磺基-NHS-LC-生物素来评估。 该方案描述了磺基-NHS-LC-生物素灌注的实验程序，以评估视网膜血管通透性。 灌注的磺基-NHS-LC-生物素保留在野生型出生后第15天（P15）视网膜的血管内，证实了完整的血 - 视网膜屏障。 相比之下，在灌注的 Eogt - / - >视网膜中，偶尔会在血管外空间检测到磺基-NHS-LC-生物素，这表明在没有的情况下血管完整性部分受损。 Eogt >（Sawaguchi et al。>，2017）。
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| High-throughput YO-PRO-1 Uptake Assay for P2X7 Receptors Expressed in HEK Cells
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Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract] P2X7 receptors are extracellular ATP-gated ion channels that play broad physiological and pathological roles in animals (Sluyter, 2017). Activation of P2X7 receptors lead to the opening of membrane channels permeable for small cations like Na+ and Ca2+ as well as fluorescent dyes such as YO-PRO-1 (Alves et al., 2014). Taking advantage of this dye-permeability, YO-PRO-1 uptake assays have been widely used to probe P2X7 receptor activity (Surprenant et al., 1996; Rassendren et al., 1997; Karasawa et al., 2017). Here we describe a step by step protocol for a high-throughput YO-PRO-1 uptake assay using HEK293 cells expressing P2X7 receptors. This 3-day protocol is particularly suited for examining effects of small molecules and ...
[摘要] P2X7受体是细胞外ATP门控离子通道，在动物中发挥广泛的生理和病理作用（Sluyter，2017）。 P2X7受体的激活导致膜通道的开放可渗透小阳离子如Na + 和Ca 2 + 以及荧光染料如YO-PRO-1（Alves） et al。，2014）。 利用这种染料渗透性，YO-PRO-1摄取试验已被广泛用于探测P2X7受体活性（Surprenant et al。，1996; Rassendren et al。 ，1997; Karasawa et al。，2017）。 在这里，我们描述了使用表达P2X7受体的HEK293细胞进行高通量YO-PRO-1摄取测定的逐步方案。 这个为期3天的方案特别适用于检查小分子和突变对P2X7受体功能的影响。 该协议改编自我们之前发表的论文（Karasawa和Kawate，2016）。
【背景】P2X7受体打开可渗透阳离子的膜通道（Surprenant et al。，1996; Sluyter，2017）。虽然电生理学仍然是量化P2X7受体活性的金标准，但这种专门技术可能并不容易获得。此外，电生理学不适合高通量筛选，因为每次记录需要大量的时间和操作。因此，荧光分子的摄取是一种广泛使用的替代方法，特别是用于筛选多种条件/突变体（Cankurtaran-Sayar et al。，2009; Qu et al。 ...
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| Small Molecule-Based Retinal Differentiation of Human Embryonic Stem Cells and Induced Pluripotent Stem Cells
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Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract] Retinal degeneration leads to loss of light-sensing photoreceptors eventually resulting in vision impairment and impose a heavy burden on both patients and the society. Currently available treatment options are very limited and mainly palliative. Ever since the discovery of human pluripotent stem cell technologies, cell replacement therapy has become a promising therapeutic strategy for these patients and may help restore visual function. Reproducibly generating enriched retinal cells including retinal progenitors and differentiated retinal neurons such as photoreceptors using human embryonic stem (ES) cells and induced pluripotent stem (iPS) cells in a dish is an essential first step for developing stem cell-based therapies. In addition, this will provide a reliable and sufficient supply ...
[摘要] 视网膜变性导致光感受器丧失，最终导致视力损害，并给患者和社会带来沉重的负担。目前可用的治疗方案非常有限，主要是姑息治疗。自从人类多能干细胞技术的发现以来，细胞替代疗法已成为这些患者的有希望的治疗策略，并可能有助于恢复视觉功能。使用人类胚胎干（ES）细胞和诱导多能干（iPS）细胞在培养皿中重现性地产生包括视网膜祖细胞和分化的视网膜神经元（例如光感受器）的富集视网膜细胞是开发基于干细胞的治疗的重要的第一步。此外，这将为研究疾病机制提供可靠和充足的人类视网膜细胞供应。在这里，我们描述了一种小分子视网膜诱导协议，已被用于生成视网膜祖细胞和分化的视网膜神经元，包括来自几个人ES和iPS细胞系的光感受器。通过该方案产生的视网膜细胞可以在视网膜下移植后的几个月内存活并且功能性地整合到正常和患病的小鼠视网膜中。
【背景】世界各地的一些团体正在开发用于从人多能干细胞产生特定细胞类型的方法。这些细胞可能在再生医学的未来作为替代细胞的来源中发挥关键作用。这些新产生的人类细胞在开发更好和更准确的人类疾病模型中非常有用，然后可用于发现具有更好功效和安全性的新药。
我们的工作重点是影响全球数百万人的视网膜退行性疾病，如黄斑变性和视网膜色素变性。视网膜中光感受器的死亡通常与这些疾病相关，并导致严重损伤或全部视力丧失。没有有效的药物治疗可以治愈这些疾病。
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