| Antimicrobial Sensitivity Assay for Bdellovibrio bacteriovorus
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Author:
Date:
2020-12-20
[Abstract] Bdellovibrio bacteriovorus, an obligate predatory bacterium [i.e., bacteria that kill and feed on other bacteria (prey)], has the potential to be used as a probiotic for the disinfection of surfaces or for the treatment of bacterial infections. One option is to use this organism in combination with antimicrobials to potentiate the effectiveness of treatments. In order to make this approach feasible more has to be known about the ability of B. bacteriovorus to resist antibiotics itself. Standard assays to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) are not suitable for B. bacteriovorus, since the small size of this bacterium (0.25-0.35 by 0.5-2 μm) prevents scattering at OD600. Since these predatory bacteria require larger prey bacteria for growth (e.g., E. coli dimensions are ...
[摘要] [摘要]蛭弧菌弧菌，一种专性捕食细菌[即，细菌杀灭和进料的其它细菌（猎物）] ，有可能使被用作表面的消毒益生菌或细菌感染的治疗。一种选择是将这种生物体与抗菌素联合使用以增强治疗效果。为了使该方法可行，必须进一步了解细菌噬菌芽孢杆菌自身抵抗抗生素的能力。标准测定法来确定最小抑制浓度（MIC）是不适合B.弧菌，由于 的小尺寸该细菌（0.25-0.35由0.5-2的微米）防止在OD散射600 。由于这些细菌掠夺需要用于生长较大的捕食的细菌（例如，大肠杆菌（E.coli）尺寸为1由1-2微米），第这里描述的用于抗微生物敏感性测定方法E基础是OD的降低600期间引起的猎物裂解增长。以前关于掠食性细菌对抗菌素耐药性的研究采用的方法无法直接将抗菌素耐药性水平与其他细菌种类进行比较。在这里，我们描述了一种确定细菌对芽孢杆菌的抗药性的方法，该方法可与被测试的参照生物体尽可能接近相同的实验条件进行比较。简要地说，最低抑菌浓度（MIC）值的B.弧菌通过在存在和不存在不同浓度的抗微生物剂的混合捕食者/猎物培养物的600nm处测量的吸光度的减少来确定。值得注意的是，可以使用不同的条件，猎物细菌和/或抗菌剂来修改此方法以获得其他掠食性细菌的抗菌素MIC值。
[背景]噬菌蛭弧菌是一种革兰氏阴性细菌掠夺是“早”在其他革兰氏阴性细菌的物种，生长在他们的牺牲，并最终杀死它们。细菌噬菌芽孢杆菌以及其他掠食性细菌有潜力用作益生菌以消毒表面或治疗细菌感染（Tyson和Elizabeth ...
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| High-level Production of Recombinant Membrane Proteins Using the Engineered Escherichia coli Strains SuptoxD and SuptoxR
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Author:
Date:
2020-08-05
[Abstract] We have previously described the development of two specialized Escherichia coli strains for high-level recombinant membrane protein (MP) production. These engineered strains, termed SuptoxD and SuptoxR, are capable of suppressing the cytotoxicity caused by MP overexpression and of producing greatly enhanced MP yields. Here, we present a Bio-protocol that describes gene overexpression and culturing conditions that maximize the accumulation of membrane-integrated and well-folded recombinant MPs in these strains.
[摘要] [摘要] 我们之前已经描述了两种用于生产高水平重组膜蛋白（MP）的大肠杆菌菌株的开发。这些工程菌株，称为SuptoxD和SuptoxR，能够抑制MP过度表达引起的细胞毒性，并产生显著提高的MP产量。在这里，我们提出一个生物协议，描述基因过度表达和培养条件，最大限度地积累膜整合和折叠良好的重组多磺酸粘多糖在这些菌株。
[背景]多磺酸粘多糖在所有活生物体的细胞中执行多种关键功能（Wagner et al.，2006；Schlegel et al.，2010），是当前和未来药物的主要靶点（Yildrim et al.，2007）。获得足够数量的分离蛋白是进行生化和结构研究的前提，这反过来又可以加深对其功能的理解，并发现新的MP靶向药物。
由于多磺酸粘多糖通常在其天然环境中以极低的丰度出现，异源宿主通常用于其重组过表达和随后的纯化。许多不同的系统已被用作原核和真核来源的多种多磺酸粘多糖的过表达宿主（Wagner等人，2006年）。其中，大肠杆菌是最受欢迎的一种，因为它的成本非常低，使用方便（Makino等人，2011年）。事实上，这种细菌已经成功地用于生产储存在蛋白质数据库中的所有重组产生的MP结构的大约20%（Dilworth等人，2018年）。尽管有这些优势和成功，但使用大肠杆菌作为MP生产的异源宿主通常伴随着严重的毒性、低水平的最终生物量和微小的最终产量（Miroux和Walker，1996；Wagner等人，2007；Link等人，2008；Gubellini等人，2011）。 ...
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