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Silicone grease - SILICAID 1010

Company: aidchim Ltd
Catalog#: H3375
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Heterologous Expression and Purification of the CRISPR-Cas12a/Cpf1 Protein
Author:
Date:
2018-05-05
[Abstract]  This protocol provides step by step instructions (Figure 1) for heterologous expression of Francisella novicida Cas12a (previously known as Cpf1) in Escherichia coli. It additionally includes a protocol for high-purity purification and briefly describes how activity assays can be performed. These protocols can also be used for purification of other Cas12a homologs and the purified proteins can be used for subsequent genome editing experiments.


Figure 1. Timeline of activities for the heterologous expression and purification of Francisella novicida Cas12a (FnCas12a) from Escherichia coli
[摘要]  该协议提供了分步说明(图1),用于在大肠杆菌中异源表达新西兰弗朗西斯菌弗朗西丝菌Cas12a(以前称为Cpf1)。 它还包括一个高纯度纯化方案,并简要介绍如何进行活性测定。 这些方案也可以用于其他Cas12a同系物的纯化,并且纯化的蛋白质可以用于随后的基因组编辑实验。

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图1.从大肠杆菌 异源表达和纯化<弗朗西斯弗朗西丝菌 Cas12a(FnCas12a)的活动时间表

【背景】原核CRISPR-Cas免疫系统通过使用CRISPR RNA(crRNA)作为外源DNA或RNA的序列特异性靶向的指导来提供针对病毒和质粒的保护(van der Oost等人,2014; Marraffini ,2015)。 1类CRISPR-Cas系统(包含I型,III型和IV型)通常形成多亚基蛋白-cRNA效应复合物,而2类系统(包含II型,V型和VI型)依赖于单个crRNA-引导的效应物核酸酶用于目标干扰(Mohanraju et al。 2016年)。

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Metal-tagging Transmission Electron Microscopy for Localisation of Tombusvirus Replication Compartments in Yeast
Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract]  Positive-stranded (+) RNA viruses are intracellular pathogens in humans, animals and plants. To build viral replicase complexes (VRCs) viruses manipulate lipid flows and reorganize subcellular membranes. Redesigned membranes concentrate viral and host factors and create an environment that facilitates the formation of VRCs within replication organelles. Therefore, efficient virus replication depends on the assembly of specialized membranes where viral macromolecular complexes are turned on and hold a variety of functions. Detailed characterization of viral replication platforms in cells requires sophisticated imaging approaches. Here we present a protocol to visualize the three-dimensional organization of the tombusvirus replicase complex in yeast with MEtal-Tagging Transmission Electron ... [摘要]  正链(+)RNA病毒是人,动物和植物中的细胞内病原体。构建病毒复制酶复合物(VRC)病毒操纵脂质流动和重组亚细胞膜。重新设计的膜集中了病毒和宿主因子,并创造了促进复制细胞器内VRC形成的环境。因此,有效的病毒复制取决于病毒大分子复合物开启并具有各种功能的特殊膜的组装。细胞中病毒复制平台的详细特征需要复杂的成像方法。在这里我们提出一个协议,用肉眼标记透射电子显微镜(METTEM)可视化酵母中的tombusvirus复制酶复合物的三维组织。该协议使我们能够用METTEM和电子断层扫描成像三维病毒复制酶分子的细胞内分布。我们的研究显示病毒复制酶分子如何在特化细胞膜内构建复制复合物。

【背景】正链RNA病毒的复制取决于细胞膜的重塑。细胞内膜作为VRC装配的结构支架,提供调节病毒复制酶活性和保护病毒RNA免受宿主抗病毒防御的必需脂质和辅因子(Miller和Krijnse-Locker,2008; den Boon <等,2010; nagy和pogany,2011;="" nagy,2016)。电子显微镜观察到具有活性vrc的复制细胞器的结构。="" vrc以单个膜囊或'小球',管状球形立方体膜,双膜囊泡(dmv)或平面寡聚体阵列装配(de="" castro等人,2013)。通常在rna病毒感染的细胞中观察到小球。它们通过在各种细胞器中内陷而形成,并具有对胞质溶胶的狭窄开口(den="" boon="" et=""> ...

Isolation and Maintenance of Striatal Neurons
Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract]  Primary cultures of murine striatal neurons are widely used to explore cellular mechanisms in neurobiology, including brain diseases. Here we describe a detailed and standardized protocol to dissect and culture embryonic murine striatal neurons GABA-positive/DARPP-32-positive for 12 days in vitro, when they show good neuronal cell connectivity and the presence of dendritic spines, which reflects the maturation of the network. [摘要]  小鼠纹状体神经元的原代培养物被广泛用于探索神经生物学中的细胞机制,包括脑部疾病。 在这里,我们描述了一个详细和标准化的协议解剖和文化胚胎小鼠纹状体神经元GABA阳性/ DARPP-32阳性12天体外,当他们显示良好的神经元细胞连接性和存在的树突 刺,反映了网络的成熟。

【背景】纹状体是运动和奖励系统的重要组成部分,纹状体神经元的功能障碍可导致各种神经元疾病,从强迫性行为(Welch et al。,2007)到神经退行性疾病,如在亨廷顿病中观察到的(Reiner等,1988)。因此,一个良好建立的纹状体文化可能是一个很有价值的研究这些和其他条件的模型。成年纹状体中的主要神经元亚型是中型多刺投射神经元(MSNs),其占所有纹状体神经元的约95%并使用抑制性递质γ-氨基丁酸(GABA)。它们具有中等大小的细胞体,复杂的树突状乔木和高密度的树突棘,可同时接受谷氨酸能和多巴胺输入。其余5%的神经元由GABA能神经间神经元组成(Graveland和DiFiglia,1985; ...

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