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Date:
2017-12-05
[Abstract] The established primary trigger of Alzheimer’s disease’s is β-amyloid (Aβ) (Mucke and Selkoe, 2012). Amyloid precursor protein (APP) endocytosis is required for Aβ generation at early endosomes (Rajendran and Annaert, 2012). APP retention at endosomes also depends on its recycling back to the plasma membrane (Koo et al., 1996; Ubelmann et al., 2017). The following recycling assay has been optimized to assess APP recycling by live murine Neuro2a cells, a neuroblastoma cell line (Ubelmann et al., 2017).
[摘要] 已确定的阿尔茨海默病的主要诱因是β-淀粉样蛋白（Aβ）（穆克和Selkoe，2012）。淀粉样蛋白前体蛋白（APP）胞吞作用是早期内涵体产生Aβ所必需的（核内体中的APP保留还取决于其回到质膜的再循环（Koo等人，1996; Rajendran和Annaert，2012）。 Ubelmann等人，2017）。已经优化了以下回收测定法以评估活的小鼠神经母细胞瘤细胞系具有Neuro2a细胞（Ubelmann等人，2017）的APP回收。
【背景】Aβ42积聚是阿尔茨海默病的主要触发因素，APP的胞吞作用需要Aβ42代（辜和Squazzo，1994; Grbovic等人，2003; Cirrito等人，2008;拉金德伦等人，2008）内吞作用后，APP可以循环回到质膜上，可能会逃避内体的处理虽然许多研究表征了APP内吞作用，但需要建立调节。 APP回收的机制。因此，强有力的，敏感的和定量的测定是必要的。已经通过免疫荧光和定量地使用表面蛋白的批量生物素化，随后追逐内吞作用和剥离或阻断表面蛋白后的循环追踪，定性地评估APP回收（辜等，1996; Yamazaki，1996; Chaufty等，2012）。
我们使用经典的免疫荧光和半定量的细胞生物学方法，开发了用于跟踪和测量具有Neuro2a细胞中的APP回收的方法。我们的测定依赖于用红色荧光蛋白（RFP）标记的APP的瞬时表达，以检测和定量APP的细胞库和使用针对APP胞外域的抗体来选择性检测和定量表面池的运输的APP。 ...
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