| Production of Phenotypically Uniform Human Cerebral Organoids from Pluripotent Stem Cells
|
|
Author:
Date:
2021-04-20
[Abstract] Recent advances in stem cell technology have allowed researchers to generate 3D cerebral organoids (COs) from human pluripotent stem cells (hPSCs). Indeed, COs have provided an unprecedented opportunity to model the developing human brain in a 3D context, and in turn, are suitable for addressing complex neurological questions by leveraging advancements in genetic engineering, high resolution microscopy, and tissue transcriptomics. However, the use of this model is limited by substantial variations in the overall morphology and cellular composition of organoids derived from the same pluripotent cell line. To address these limitations, we established a robust, high-efficiency protocol for the production of consistent COs by optimizing the initial phase of embryoid body (EB) formation and ...
[摘要] [摘要]在干细胞技术的最新进展已经使研究人员能够产生3D脑类器官由人多能干细胞（（COS）hPSCs ）。事实上，COS提供了一个前所未有的机会，发展人的大脑在3D场景模型，并反过来，适用于通过利用在进步，基因工程，高分辨率显微镜处理复杂的神经系统的问题，并组织转录。然而，在U SE 该模型的模型受到源自同一多能细胞系的类器官的整体形态和细胞组成的实质性变化的限制。为了解决这些限制，我们建立了坚固的，高-通过优化的初始阶段用于生产相一致的COS效率协议胚状体（EB）形成和神经诱导。使用该协议，采购员可以重复地与产生一个均匀的尺寸，形状，以及跨多个批次的细胞组合物。˚F urthermore，类器官的是发展了延长的时间段（3 - 6个月）显示建立的相对成熟的功能，包括电生理学活性的神经元，少突胶质细胞和祖细胞的产生。因此，该平台提供了可用于研究人脑发育和相关疾病的强大实验模型。
图形摘要：
多能干细胞对脑类器官发育的概述
[背景技术]在最新进展在体外从人多能干细胞（衍生3D脑类器官（COS）的发展hPSCs ...
|
|
|
| Generation of Human iPSC-derived Neural Progenitor Cells (NPCs) as Drug Discovery Model for Neurological and Mitochondrial Disorders
|
|
Author:
Date:
2021-03-05
[Abstract] The high attrition rate in drug development processes calls for additional human-based model systems. However, in the context of brain disorders, sampling live neuronal cells for compound testing is not applicable. The use of human induced pluripotent stem cells (iPSCs) has revolutionized the field of neuronal disease modeling and drug discovery. Thanks to the development of iPSC-based neuronal differentiation protocols, including tridimensional cerebral organoids, it is now possible to molecularly dissect human neuronal development and human brain disease pathogenesis in a dish. These approaches may allow dissecting patient-specific treatment efficacy in a disease-relevant cellular context. For drug discovery approaches, however, a highly reproducible and cost-effective cell model is ...
[摘要] [摘要]药物开发过程中的高流失率要求使用其他基于人的模型系统。但是，在脑部疾病的情况下，不适合对活的神经元细胞进行采样以进行化合物测试。人类诱导的多能干细胞（iPSC ）的使用彻底改变了神经元疾病建模和药物发现领域。由于基于iPSC的神经元分化方案（包括三维脑类器官）的发展，现在可以在一个碟子中分子解剖人神经元发育和人脑疾病的发病机理。这些方法可以允许在与疾病相关的细胞环境中解剖患者特异性的治疗功效。但是，对于药物发现方法，需要高度可复制且具有成本效益的细胞模型。在这里，我们描述了一种一步-步骤，用于从人产生健壮和可膨胀的神经祖细胞（NPC）工艺的iPSC 。用此协议生成的NPC是同质的且高度增殖。这些功能使NPC适合开发用于药物发现的高通量化合物筛选。人iPSC衍生的NPC示出了代谢依赖于线粒体活性，因此可也用于研究神经病症，其中线粒体功能受到影响。该协议涵盖了制备，培养和表征人iPSC来源的NPC所需的所有步骤。
图形摘要：
示意性的协议的所述发电机密封的离子人类源自iPSC的的NPC
[背景技术]近年来，目标为中心的药物发现的缺点已经用于寻址的神经系统疾病的方案变得明显，特别是（保罗等人，2010） ...
|
|
|
| Fluidigm Based Single-cell Gene Expression Library Preparation from Patient-derived Small Intestinal Organoids
|
|
Author:
Date:
2020-10-05
[Abstract] In this protocol, we describe our methods to isolate crypts from patients' biopsy samples and to culture human intestinal stem cells as it’s called “organoid.” Beyond that, we describe how to dissociate organoids cells into single cells for single-cell analysis as a further application. This protocol should provide investigators sufficient tools to generate human organoids from biopsy samples and to accomplish a stable in-vitro assay system.
[摘要] [摘要]在此协议中，我们描述了从患者的活检样本中分离隐窝并培养人类肠干细胞（称为“类器官”）的方法。除此之外，我们还介绍了如何将类器官细胞分解为单细胞以进行单细胞分析，作为进一步的应用。该方案应为研究人员提供足够的工具，以从活检样品中产生人类器官并完成稳定的体外测定系统。
[背景]肠上皮是一个多功能组织即编排动态平衡并形成物理屏障。由肠干细胞（ISC）产生的每个肠上皮细胞（IEC）每4-5天更新一次该上皮（Crosnier等，2006 ）。ISC位于隐窝的底部，并表达各种文献先前报道的特定标记（Muñoz等，2012 ；Clevers ，2013 ）。研究表明，干细胞正确更新的功能障碍与肠道疾病有关，对ISCs动态的了解可能阐明了包括炎症性肠病（IBD）在内的各种疾病的发病机制（Okamoto et al。，2016 ）。
然而，由于缺乏能概括生理性肠上皮层的有效模型，因此对肠干细胞特性的研究具有挑战性。史诗般的“类器官”的引入克服了种种障碍（Sato等人，2009和2011 ），可以从单个ISC体外建立类器官，并忠实地保留其起源组织的生理和病理特征（Middendorp等人）。 。，2014 ）。类器官已被用于各种胃肠道疾病解剖基础病理变化（Fatehullah 。等人，2016; Noben等人，2017 ...
|
|
|