Preparing Immunolocalization Slides of Maize Meiotic Chromosomes for Three-dimensional Microscopy
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] The protocol provides fully detailed steps for preparing microscopic slides of acrylamide-embedded maize meiotic cells. This method is particularly useful for examining chromatin structure and chromosome arrangement without destroying the three-dimensional organization of the nucleus.
[摘要] [摘要] 该协议提供了制备丙烯酰胺包埋的玉米减数分裂细胞显微玻片的完整详细步骤。该方法对于检查染色质结构和染色体排列而不破坏细胞核的三维结构特别有用。
[背景] 减数分裂是一个动态过程,涉及同源染色体配对,突触和重组。用于研究减数分裂蛋白的定位和动力学的细胞学分析对于了解这些过程的细节至关重要。在许多显微载玻片制备方法中,空间染色质的组织受到机械加工或化学溶剂的破坏。在这里,我们描述了三维显微镜协议,以分析染色质结构和减数分裂蛋白的定位,而不会干扰核组织。
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Immunolabeling of Maize Meiocytes
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Author:
Date:
2020-04-05
[Abstract] This protocol describes a quick method for immunolocalization of meiotic proteins in maize. It includes a fixation step that allows for long-term storage of material and provides good preservation of chromatin structure.
[摘要] [摘要] 该协议描述了一种在玉米中进行减数分裂蛋白免疫定位的快速方法。它包括一个固定步骤,可以长期保存材料并提供良好的染色质结构保存。
[背景] 卵母细胞是生殖细胞,在其中发生同源染色体配对,突触和重组的专门过程,然后染色体分离以产生单倍体核。阐明减数分裂蛋白的定位对于理解这些过程至关重要。尽管此协议可能有多种变体,但我们发现微波加热步骤对于使其可靠地工作于玉米中的免疫定位至关重要。
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Phagocytosis Assay for α-Synuclein Fibril Uptake by Mouse Primary Microglia
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Microglia are professional phagocytes in the brain and deficiency in their phagocytic activity plays an important role in Parkinson’s disease. This protocol mainly describes the phagocytosis assay for uptake of α-synuclein preformed fibrils, a pathologic form of α-synuclein, by primary microglia.
[摘要] 小胶质细胞是大脑中的专业吞噬细胞,其吞噬活性的缺乏在帕金森病中起重要作用。 该方案主要描述了通过原代小胶质细胞摄取α-突触核蛋白预先形成的原纤维(α-突触核蛋白的病理形式)的吞噬作用测定。
【背景】作为大脑的免疫细胞,小胶质细胞在中枢神经系统中起着关键作用。在生理状态下,小胶质细胞不断探索周围环境并参与突触修剪。小胶质细胞可被任何类型的病理事件或脑内稳态的变化激活(Wolf et al。,2017)。激活后,小胶质细胞经历形态学变化,增殖,分泌炎性细胞因子,迁移至病变部位,吞噬病原体,病细胞,碎片,甚至细胞外蛋白质聚集体(Kettenmann et al。,2011; Fu et al。,2014)。 α-突触核蛋白是神经元中的丰富蛋白质,并且是帕金森病中称为路易体和路易神经突的神经元内包涵体的主要成分(Luk 等人,,2012)。最近的研究表明α-突触核蛋白经历细胞间扩散,小胶质细胞是α-突触核蛋白的主要清除剂,它可能承担来自神经元的α-突触核蛋白的负担(Wolf et al。,2017 )。在这里,我们描述了使用人α-突触核蛋白单体产生预先形成的原纤维并通过小胶质细胞吞噬作用测量α-突触核蛋白预先形成的原纤维的摄取的方案(Du et al。,2017)。
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