| Protocol for Isolation, Stimulation and Functional Profiling of Primary and iPSC-derived Human NK Cells
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Author:
Date:
2020-12-05
[Abstract] Natural killer (NK) cells are innate immune cells, characterized by their cytotoxic capacity, and chemokine and cytokine secretion upon activation. Human NK cells are identified by CD56 expression. Circulating NK cells can be further subdivided into the CD56bright (~10%) and CD56dim NK cell subsets (~90%). NK cell-like cells can also be derived from human induced pluripotent stem cells (iPSC). To study the chemokine and cytokine secretion profile of the distinct heterogenous NK cell subsets, intracellular flow cytometry staining can be performed. However, this assay is challenging when the starting material is limited. Alternatively, NK cell subsets can be enriched, sorted, stimulated, and functionally profiled by measuring secreted effector molecules in the supernatant by Luminex. Here, ...
[摘要] [摘要]天然杀伤（NK）细胞是先天性免疫细胞，其特征在于其细胞毒性能力以及活化后的趋化因子和细胞因子分泌。人NK细胞通过CD56表达鉴定。循环的NK细胞可进一步细分为CD56亮（约10％）和CD56暗NK细胞亚群（约90％）。NK细胞样细胞也可以源自人诱导的多能干细胞（iPSC）。为了研究不同的异源NK细胞亚群的趋化因子和细胞因子分泌概况，可以进行细胞内流式细胞仪染色。然而，当起始原料有限时，该测定法具有挑战性。或者，可以通过Luminex测量上清液中分泌的效应子分子来富集，分选，刺激和功能性分析NK细胞亚群。在这里，我们提供了一种快速直接的方案，用于分离和刺激原代NK细胞或iPSC衍生的NK细胞样细胞，并随后检测分泌的细胞因子和趋化因子，这也适用于少量细胞。
[背景]自然杀伤（NK）细胞是先天免疫系统的一部分，提供第一线防御病毒感染和畸形。在人血中，可以基于CD56和CD16表达鉴定出两个不同的NK细胞群体：CD56明亮的CD16 +/-和CD56暗的CD16 + ...
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| Generation of T cells from Human and Nonhuman Primate Pluripotent Stem Cells
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Author:
Date:
2020-07-05
[Abstract] Pluripotent stem cells (PSCs) have the potential to provide homogeneous cell populations of T cells that can be grown at a clinical scale and genetically engineered to meet specific clinical needs. OP9-DLL4, a stromal line ectopically expressing the Notch ligand Delta-like 4 (DLL4) is used to support differentiation of PSCs to T-lymphocytes. This article outlines several protocols related to generation of T cells from human and non-human primate (NHP) PSCs, including initial hematopoietic differentiation of PSC on OP9 feeders or defined conditions, followed by coculture of the OP9-DLL4 cells with the PSC-derived hematopoietic progenitors (HPs), leading to efficient differentiation to T lymphocytes. In addition, we describe a protocol for robust T cell generation from hPSCs conditionally ...
[摘要] [摘要] 多能干细胞（PSCs）有潜力提供同质的T细胞群体，这些细胞可以在临床规模上生长，并通过基因工程来满足特定的临床需求。OP9-DLL4是一种异位表达Notch配体Delta-like 4（DLL4）的基质细胞系，用于支持psc向T淋巴细胞的分化。本文概述了从人类和非人类灵长类（NHP）PSC中产生T细胞的几种方法，包括在OP9喂食者或特定条件下对PSC进行初始造血分化，然后将OP9-DLL4细胞与PSC衍生的造血祖细胞（HPs）共培养，从而有效地分化成T淋巴细胞。此外，我们描述了一个从有条件表达ETS1的hPSCs中产生健壮T细胞的方案。所提出的协议提供了一个平台，用于疾病建模和评估其在大型动物模型免疫治疗中的应用。
[背景] T淋巴细胞（T细胞）在细胞介导的免疫反应中起着关键作用，参与肿瘤细胞的监测和杀伤。在过去的几十年里，已经开发了几种策略来重定向、培养和/或增强抗肿瘤的T淋巴细胞（Houot等人，2015年；June等人，2018年），并将其用于基于T细胞的过继免疫治疗。最近的临床试验表明，用嵌合抗原受体（CAR）-T细胞治疗复发性和难治性淋巴瘤患者的疗效显著（Riviere和Sadelain，2017）。
人类多能干细胞（hPSCs），包括胚胎（hESCs）和诱导（hiPSCs），为生产用于过继性细胞免疫疗法的T细胞提供了一种很有前景的资源，可与基因工程技术相结合，产生现成的CAR ...
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| Myeloid Progenitor Transformation Assay
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Numerous oncogenes have been identified to cause leukemia. For example, chromosomal translocation generates various fusion genes of the mixed-lineage leukemia (MLL) gene and a partner gene in leukemia, whose gene products transform primary myeloid progenitors into an immortalized state. To characterize the transforming ability of leukemic oncogenes, researchers in the field have developed an ex vivo murine myeloid transformation assay using retroviral gene transduction and its protocol has been improved over the past 10 years. Here, we provide the detailed procedure for this assay.
[摘要] 许多致癌基因已被确定为导致白血病。 例如，染色体易位在白血病中产生混合谱系白血病（MLL ）基因和伴侣基因的各种融合基因，其基因产物将原始骨髓祖细胞转化为永生状态。 为了表征白血病癌基因的转化能力，本领域的研究人员已经利用逆转录病毒基因转导开发了一种离体小鼠骨髓转化试验，其方案在过去的10年中得到了改进。 在这里，我们提供了这个检测的详细程序。
【背景】染色体易位产生多种导致白血病的MLL融合基因（Meyer等人，2017）。野生型混合谱系白血病（MLL）蛋白质起着转录调节剂的作用，其在造血不成熟祖细胞中增强包括同源框（homoxox（Hox））基因在内的一组基因的表达（Jude等。，2007）。在正常造血期间，Hox基因在干/祖细胞部分中表达，但在分化过程中转录下调（Somervaille和Cleary，2006; Yokoyama等人， 2013年）;然而，MLL融合蛋白组成性地上调其靶基因并阻断分化以在离体培养条件下建立永生状态。最近，我们报道了MLL-ENL和MLL-AF10融合蛋白招募AF4以激活转录并且还募集DOT1L复合物以维持相同靶基因的转录以有效地转化造血祖细胞（Okuda等人， ...
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