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Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)

佛波醇12-豆蔻酸酯13-乙酸酯

Company: Sigma-Aldrich
Catalog#: P8139
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Immunophenotyping and Intracellular Staining of Fixed Whole Blood for Mass Cytometry (CyTOF)
Author:
Date:
2020-09-05
[Abstract]  In this report, we present the implementation of mass cytometry for intracellular staining using fixed whole blood. In our assay described here, 250 µl of whole blood, is stimulated in vitro with PMA/ionomycin (or left unstimulated), in the presence of secretion inhibitors (brefeldin A and monensin), lysed-fixed using SMART TUBE buffers, barcoded (optional), surface stained, fixed, stained for intracellular markers, fixed and DNA stained. Using 250 µl of whole blood from a healthy donor, we show that the expression of major lineage populations such as T cells, B cells, NK cells and monocytes, as well as cytokines such as CD4+ and CD8+ IFNγ and TNFα across multiple batches (n = 27) is consistent, with the co-efficient of variation (CVs) ≤ 21%, implying ... [摘要]  [摘要] 在本报告中,我们介绍了使用固定全血在细胞内染色中进行细胞计数的方法。在此处所述的测定中,在存在分泌抑制剂(布雷菲德菌素A和莫能菌素)的情况下,用PMA /离子霉素体外刺激(或不刺激)250 µl全血,使用SMART TUBE缓冲液裂解固定,加条形码(可选) ),表面染色,固定,细胞内标记物染色,固定和DNA染色。使用250微升的全血从健康供体中,我们表明,主要的谱系种群,例如T细胞,B细胞,NK细胞和单核细胞,以及细胞因子,例如CD4的表达+ 和CD8 + IFN γ 和TNF α 多个批次(n = 27)之间的一致性是一致的,变异系数(CV)≤21 %,这意味着最小的变异性。对于每种主要细胞类型,该百分比报告为单峰百分比。据报道,响应刺激的细胞因子表达的百分比为直接亲代细胞类型的百分比。该方案具有许多好处:从生物学的角度来看,它可以应用于临床研究,尤其是在抽血量有限的情况下。从技术上讲,该协议可适用于条形码,这增加了更均匀的样品染色以及抗体保守性的好处,特别是对于大型研究人群。最后,对于包括当前全球COVID-19大流行在内的涉及传染病的研究,该方案​​允许在处理和染色之前固定传染性样品,从而降低了生物安全风险。

[背景 ] ...

In vitro Demonstration and Quantification of Neutrophil Extracellular Trap Formation
Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract]  In the recent decade, neutrophil extracellular traps (NETs) have been identified and confirmed as a new anti-microbial weapon of neutrophils. In this protocol, we describe easy methods to demonstrate NET formation by immunofluorescence staining of extracellular chromatin fiber with anti-DNA/Histone H1 antibody and quantification of NETs by using a non-cell-permeable DNA specific dye Sytox orange. [摘要]  近十年来,嗜中性粒细胞胞外捕获物(NETs)已被鉴定并确认为一种新的抗微生物中性粒细胞武器。 在该方案中,我们描述了通过使用抗DNA /组蛋白H1抗体的细胞外染色质纤维的免疫荧光染色和通过使用非细胞可渗透的DNA特异性染料Sytox orange来定量NETs的简便方法来证明NET形成。
【背景】嗜中性粒细胞构成循环白细胞中最大的进化保守部分。他们通过各种机制建立了针对病原体的第一道防线,包括形成嗜中性粒细胞胞外捕获物(NETs)。在此过程中,活化的嗜中性粒细胞从细胞核中排出染色质纤维。入侵的病原体然后被捕获在染色质网络内并被高度浓缩的NET缠结的抗微生物蛋白如髓过氧化物酶(MPO)和弹性蛋白酶(Brinkmann等人,2004)杀死。然而,NETs是一把双刃剑;来自过度活化的嗜中性粒细胞的无限制的NET形成也可能导致严重的组织损伤,例如通过NET的组蛋白组分的细胞毒性作用(Saffarzadeh等人,2012)。中性粒细胞过度活化并具有增强的形成NETs的能力的病理状况的一个例子是系统性红斑狼疮。狼疮患者血清中针对双链DNA及其它组分的抗体水平升高(Knight and Kaplan,2012; Yu and ...

Efficient Isolation of Influenza Specific CTLs
Author:
Date:
2016-06-20
[Abstract]  Human antigen-specific CD8+ T-cell clones are valuable tools for dissecting CD8+ T-cell responses against antigens derived from infectious agents, cancer and self antigens. Here we describe a protocol for isolating human antigen-specific CD8+ T cells. This protocol uses surface capture of IFNγ to identify antigen responsive cells that are then cloned by single-cell sorting. Here we use CD8+ T-cell responses to influenza matrix protein (MP) as an example, but this approach can be applied to any antigen specificity. [摘要]  人抗原特异性CD8 + T细胞克隆是用于解剖来自感染剂,癌症和自身抗原的抗原的CD8 + T细胞应答的有价值的工具。 在这里我们描述了用于分离人抗原特异性CD8 + T细胞的方案。 该协议使用IFNγ的表面捕获来鉴定抗原反应性细胞,然后通过单细胞分选克隆。 这里我们使用CD8 + T细胞对流感基质蛋白(MP)的反应作为例子,但这种方法可以应用于任何抗原特异性。

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