| Charging State Analysis of Transfer RNA from an α-proteobacterium
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Author:
Date:
2020-12-05
[Abstract] Transfer RNA (tRNA) is an essential link between the genetic code and proteins. During the process of translation, tRNA is charged with its cognate amino acid and delivers it to the ribosome, thus serving as a substrate of protein synthesis. To analyze the charging state of a particular tRNA, total RNA is purified and analyzed on an acid-urea gel. Separated RNA is then transferred to a membrane and detected with a probe for the tRNA of interest. Here, we present an improved protocol to analyze the tRNA charging state in the α-proteobacterium Rhodopseudomonas palustris. Compared to the classical method, the RNA isolation step is optimized to suit this organism. Additionally, a non-radioactive platform is used for electrophoresis and Northern blots. This significantly reduces ...
[摘要] [摘要]转移RNA（tRNA）是遗传密码与蛋白质之间的重要纽带。在翻译过程中，tRNA带有其同源氨基酸，并将其传递至核糖体，因此可作为蛋白质合成的底物。为了分析特定tRNA的电荷状态，纯化总RNA并在酸性尿素凝胶上进行分析。然后将分离的RNA转移到膜上并用目标tRNA的探针进行检测。在这里，我们提出了一种改进的协议来分析α-变形杆菌Rhodopseudomonas palustris中的tRNA充电状态 。与传统方法相比，优化了RNA分离步骤以适合这种生物。另外，非放射性平台用于电泳和RNA印迹。这显着减少了此协议所需的时间和精力。
[背景] tRNA的主要功能是，与其他翻译因素的帮助，以确保mRNA的蛋白质的准确的翻译。氨基酰基-tRNA（带电）将氨基酸带到核糖体中以延长肽段，然后释放不带电荷的tRNA。tRNA的充电状态主要取决于可用资源（即氨基酸）及其被核糖体的消耗量。为了分析细胞tRNA的充电状态，已经开发了使用酸性脲凝胶分离总RNA并通过Northern印迹检测感兴趣的tRNA的方法（Janssen等人，2012； ...
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| Ex vivo Analysis of Lipolysis in Human Subcutaneous Adipose Tissue Explants
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] Most studies of human adipose tissue (AT) metabolism and functionality have been performed in vitro on isolated mature adipocyte or in situ using the microdialysis technique (Lafontan, 2012). However, these approaches have several limitations. The use of mature isolated adipocytes is limiting as adipocytes are not in their physiological environment and the collagenase digestion process could affect both adipocyte survival and functionality. While metabolic studies using microdialysis have brought the advantage of studying the lipolytic response of the adipose tissue in situ, it provides only qualitative measures but does not give any information on the contribution of different adipose tissue cell components. Moreover, the number of microdialysis probes that can ...
[摘要] 人脂肪组织（AT）代谢的上havebeen执行的大多数研究和功能的体外上分离的脂肪细胞成熟或原位使用微透析技术（Lafontan，2012）。但是，这些方法有几个限制。成熟的分离的脂肪细胞的使用是有限的，因为脂肪细胞不在其生理环境中，胶原酶消化过程可能影响脂肪细胞的存活和功能。虽然微透析代谢研究带来了学习原位脂肪组织中的的脂肪分解反应的优点的它仅提供定性的措施，但并没有给出不同的脂肪组织细胞成分的贡献的任何信息。此外，可以在受试者中同时使用的微透析探针的数量是有限的，并且可以受到局部血流量变化和微透析样品的分子大小截断的影响。在这里，我们提出了一个协议，以评估对脂肪组织的功能的体外在AT植允许脂肪组织的研究中其整个范围内，几个小时。此外，可以评估脂肪分解的细胞特异性影响。直接在脂肪组织基质血管室。在脂肪组织中（Gao等人，2016）。
【背景】人类白色脂肪组织（WAT）在体内能量平衡中起主要作用。脂肪细胞是表达特异性脂质处理代谢活动的特化细胞，构成超过90％的WAT体积（Lafontan，2012）。除了脂肪细胞，其他细胞类型是人类WAT中存在的例如，血管细胞，免疫细胞（淋巴细胞和巨噬细胞）和祖细胞在WAT重构和更新参与。脂肪细胞的代谢活动受到局部和全身途径整合的严格控制。在合成代谢或分解代谢条件影响调制的净脂肪细胞的代谢活性神经体液信号， I.E. ...
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