| Isolation, Culture, and Differentiation of Primary Myoblasts Derived from Muscle Satellite Cells
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] The skeletal muscle is key for body mobility and motor performance, but aging and diseases often lead to progressive loss of muscle mass due to wasting or degeneration of muscle cells. Muscle satellite cells (MuSCs) represent a population of tissue stem cells residing in the skeletal muscles and are responsible for homeostatic maintenance and regeneration of skeletal muscles. Growth, injury, and degenerative signals activate MuSCs, which then proliferate (proliferating MuSCs are called myoblasts), differentiate and fuse with existing multinuclear muscle cells (myofibers) to mediate muscle growth and repair. Here, we describe a protocol for isolating MuSCs from skeletal muscles of mice for in vitro analysis. In addition, we provide a detailed protocol on how to culture and ...
[摘要] [摘要] 骨骼肌是身体活动和运动表现的关键，但是衰老和疾病通常会由于肌肉细胞的浪费或变性而导致肌肉质量的逐步丧失。肌卫星细胞（MuSCs）代表的组织STE群体米细胞小号居住在骨骼肌和负责骨骼肌的体内平衡维持和再生。生长，损伤和变性信号激活MuSC，然后增殖（增殖的MuSC被称为成肌细胞），分化并与现有的多核肌肉细胞（肌纤维）融合，以介导肌肉的生长和修复。在这里，我们描述了从小鼠骨骼肌中分离MuSC的体外实验方案分析。此外，我们提供了有关如何将原代成肌细胞培养和分化成肌管的详细协议，以及用于表征细胞的免疫荧光染色程序。这些方法对于在体外模拟再生肌生成以了解MuSC 的动力学，功能和分子调控至关重要。
[背景] 通过多种细胞功能维持肌肉的动态平衡，对于保持肌肉的完整性至关重要。组织特异性成体干细胞能够在整个生命中连续不断地再生局部组织。在成年骨骼肌中，称为肌肉卫星细胞（MuSC）的干细胞群具有强大的再生能力，这是肌肉动态平衡的关键（Yin 等人，2013； Dumont 等人，2016）。静态MuSC位于与肌肉纤维并列的基底层下方的壁iche中，负责肌肉的生长和再生（Yin 等人，2013； Dumont 等人，2016）。
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| Enzymatic Synthesis and Fractionation of Fluorescent PolyU RNAs
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] The physical properties of viral-length polyuridine (PolyU) RNAs, which cannot base-pair and form secondary structures, are compared with those of normal-composition RNAs, composed of comparable numbers of each of A, U, G and C nucleobases. In this protocol, we describe how to synthesize fluorescent polyU RNAs using the enzyme polynucleotide phosphorylase (PNPase) from Uridine diphosphate (UDP) monomers and how to fractionate the polydisperse synthesis mixture using gel electrophoresis, and, after electroelution, how to quantify the amount of polyU recovered with UV-Vis spectrophotometry. Dynamic light scattering was used to determine the hydrodynamic radii of normal-composition RNAs as compared to polyU. It showed that long polyU RNAs behave like linear polymers for which the radii scale ...
[摘要] 将不能碱基配对并形成二级结构的病毒长度聚尿苷（PolyU）RNA的物理性质与正常组成RNA的物理性质进行比较，正常组成RNA由相当数量的A，U，G和C核碱基组成。 在该协议中，我们描述了如何使用来自二磷酸尿苷（UDP）单体的酶多核苷酸磷酸化酶（PNPase）合成荧光polyU RNA以及如何使用凝胶电泳分离多分散合成混合物，并且在电洗脱后，如何量化 用UV-Vis分光光度法回收polyU。 与polyU相比，动态光散射用于确定正常组成RNA的流体动力学半径。 结果表明，长polyU RNA的行为类似于线性聚合物，其半径范围为链长为N 1/2 ，而正常组成RNA则作为紧凑的支链RNA，其半径范围为 如N 1/3 。
【背景】 PolyU作为物理对象： PolyU是一种由重复的尿苷残基组成的非生物RNA分子，因此，它不能与Watson-Crick碱基对缺乏RNA二级结构（Martin和Ames，1962; Richards et al。，1963）。 PolyU具有非常弱的碱基堆积能量，导致缺乏螺旋排序 - 除了低于4°C（Richards et al。，1963）。由于缺乏这种结构，polyU ...
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| Quantification of the Composition Dynamics of a Maize Root-associated Simplified Bacterial Community and Evaluation of Its Biological Control Effect
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Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract] Besides analyzing the composition and dynamics of microbial communities, plant microbiome research aims to understanding the mechanism of plant microbiota assembly and their biological functions. Here, we describe procedures to investigate the role of bacterial interspecies interactions in root microbiome assembly and the beneficial effects of the root microbiota on hosts by using a maize root-associated simplified seven-species (Stenotrophomonas maltophilia, Ochrobactrum pituitosum, Curtobacterium pusillum, Enterobacter cloacae, Chryseobacterium indologenes, Herbaspirillum frisingense and Pseudomonas putida) synthetic bacterial community described in our previous work. Surface-sterilized maize seeds were grown in a ...
[摘要] 除了分析微生物群落的组成和动态外，植物微生物群落研究的目的在于了解植物微生物群落组装的机制及其生物学功能。在这里，我们描述了通过使用与玉米根相关的简化的七种物种（嗜麦芽窄食单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia），）来研究细菌种间相互作用在根微生物群组装中的作用以及根菌群对宿主的有益影响的程序。 Ochrobactrum pituitosum ，Curtobacterium pusillum ，阴沟肠杆菌， Chryseobacterium indologenes ，<在我们以前的工作中描述过的假单胞菌（pseudomonas putida））合成细菌群落。表面灭菌的玉米种子在含有多种细菌的悬浮液中浸泡后，在基于双管生长室的非生物体系中生长。通过对7种菌株中的每种菌株选择性培养基的培养依赖性方法追踪定殖在玉米根部的细菌群组成的动态。通过监测社区结构的变化来评估细菌相互作用对社区组装的影响。通过量化（1）真菌植物病原体，种子表面上的fusarium="" verticillioides和（2）幼苗枯萎的严重程度来评估简化的7种群落的植物保护效果真菌引起的疾病，在细菌群落的存在和不存在的情况下。我们的方案将作为研究实验室条件下植物="" -=""> ...
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