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Date:
2020-10-05
[Abstract] The Legionella effector protein SidJ has recently been identified to perform polyglutamylation on another Legionella effector, SdeA, ablating SdeA’s activity. SidJ is a kinase-like protein that requires the small eukaryotic protein calmodulin to perform glutamylation. Glutamylation is a relatively uncommon type of post-translational modification, where the amino group of a free glutamate amino acid is covalently linked to the γ-carboxyl group of a glutamate sidechain in a substrate protein. This protocol describes the SidJ glutamylation reaction using radioactive [U-14C] glutamate and its substrate SdeA, the separation of proteins by gel electrophoresis, preparation of gels for radioactive exposure, and relative quantification of glutamylation activity. This ...
[摘要] [摘要]在军团菌效应蛋白SidJ最近被确定为另一个执行polyglutamylation军团效应，SdeA，烧蚀SdeA的活动。SidJ是一种激酶样蛋白，需要小的真核蛋白钙调蛋白才能进行谷氨酰化。谷氨酰化是翻译后修饰的相对不常见的类型，其中游离谷氨酸氨基酸的氨基与底物蛋白质中谷氨酸侧链的γ-羧基共价连接。该协议描述了使用放射性[U- 14]的SidJ谷氨酰化反应 C]谷氨酸及其底物SdeA，通过凝胶电泳分离蛋白质，制备用于放射暴露的凝胶，以及相对定量的谷氨酰化活性。该方法可用于鉴定底物进行谷氨酰化，表征底物和由突变引起的谷氨酰胺酶活性，以及鉴定具有谷氨酰化活性的蛋白质。一些研究已经使用[ 3 H]谷氨酸（Regnard等，1998）和使用GT335抗体（Wolff等，1992）来分析谷氨酰化。但是，使用[U- 14 C] g谷氨酸盐需要更短的放射性暴露时间，而不依赖于抗体特异性。
[背景]嗜肺军团菌是感染细菌，造成军团病（麦克达德等人，1977） ，肺炎的一个潜在的致命的形式。在感染期间，Legionell ...
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