| Molecular Size Analysis of Recombinant Importin-histone Complexes Using Analytical Ultracentrifugation
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Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract] Histones constitute the protein components of nucleosomes. Despite their small sizes, histones do not diffuse through the nuclear pore complex. Instead, they are transported to the nucleus by importins, either alone or in complex with histone chaperones. Determining the molecular size of the importin-histone complexes is key to understanding the mechanism of histone transport and also the potential roles of importins as histone chaperones and in the assembly of nucleosomes. Here we report a simple and reproducible sedimentation-velocity based method to determine the molecular sizes of importin-histone complexes using analytical ultracentrifugation. The method does not use any reporter tags or interaction with column resin thereby analyzing the interactions of the native proteins.
[摘要] [摘要] 组蛋白构成核小体的蛋白质成分。尽管其尺寸很小，但组蛋白不会通过核孔复合物扩散。取而代之的是，它们单独或与组蛋白分子伴侣复合地被重要蛋白转运至细胞核。确定importin-histone复合物的分子大小是理解组蛋白转运机制的关键，也是importins作为组蛋白伴侣和在核小体组装中的潜在作用的关键。在这里，我们报告了一种简单且可重现的沉降速度为基础的方法，该方法使用分析超速离心法来确定importin-histone配合物的分子大小。该方法不使用任何报告子标签或与色谱柱树脂的相互作用，从而分析了天然蛋白质的相互作用。
[背景] 核小体是真核染色质的最基本的结构和功能单元。组蛋白H2A，H2B，H3和H 4是核小体的蛋白质成分。每个核包括147个碱基的DNA wrapp的对编绕Ñ H3-H4四聚体和H2A-H2B二聚体的两个拷贝（Luger的等人，1997年一）。像细胞中的其他蛋白质一样，组蛋白在细胞质中合成。然而，核小体组装在核中。尽管它们的小尺寸（单体是10-15 kDa）的，组蛋白不通过核孔复合物扩散，而是可以单独使用或在复合物与由组蛋白importins伴侣输送要么（约翰逊-SAL IBA 等人，2000 ; Baake 等等人，2001；Mosammaparast 等人，2001，2002a和2002b；Muhlhausser ...
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| BMV Propagation, Extraction and Purification Using Chromatographic Methods
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Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract] Brome mosaic virus (BMV) is a well-known plant virus representing single-stranded RNA (ssRNA) positive-sense viruses. It has been widely used as a model in multiple studies concerning plant virus biology, epidemiology and the application of viral capsids in nanotechnology. Herein, we describe a method for BMV purification based on ion-exchange and size-exclusion chromatography. The presented method is of similar efficiency to previously described protocols relying on differential centrifugation and can easily be scaled up. The resulting BMV capsids are stable and monodisperse and can be used for further applications.
[摘要] 雀麦花叶病毒（BMV）是众所周知的植物病毒，代表单链RNA（ssRNA）正义病毒。 它已被广泛用作植物病毒生物学，流行病学和病毒衣壳在纳米技术中的应用的多项研究中的模型。 在本文中，我们描述了基于离子交换和尺寸排阻色谱的BMV纯化方法。 所提出的方法与先前描述的依赖于差速离心的方案具有相似的效率，并且可以容易地按比例放大。 得到的BMV衣壳是稳定的并且是单分散的，并且可以用于进一步的应用。
【背景】纳米技术要克服的关键挑战之一是制定有效的和组织特异性的药物递送方法。植物病毒和病毒样颗粒（VLP）具有生物相容性和可生物降解性，不含对人类或动物健康有害的病原体，是合成药物载体的安全替代品，通常会激活免疫系统的不良反应或积聚在免疫系统中。身体到毒性水平。最后，病毒衣壳的生产相对便宜且快速（Ren et al。，2007; Arcangeli et al。，2014）。
Bromoviridae 家族的雀麦花叶病毒（BMV）是用作纳米颗粒载体的良好候选物，因为它显示出所有上述特征并且是研究最多的植物病毒之一（Figlerowicz，2000; Alejska et al。，2005; Urbanowicz et al。，2005; Wierzchoslawski et al。，2006; Kao vet al。 ...
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| Implementation of Blue Light Switchable Bacterial Adhesion for Design of Biofilms
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Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract] Control of bacterial adhesions to a substrate with high precision in space and time is important to form a well-defined biofilm. Here, we present a method to engineer bacteria such that they adhere specifically to substrates under blue light through the photoswitchable proteins nMag and pMag. This provides exquisite spatiotemporal remote control over these interactions. The engineered bacteria express pMag protein on the surface so that they can adhere to substrates with nMag protein immobilization under blue light, and reversibly detach in the dark. This process can be repeatedly turned on and off. In addition, the bacterial adhesion property can be adjusted by expressing different pMag proteins on the bacterial surface and altering light intensity. This protocol provides light ...
[摘要] 在空间和时间上高精度地控制细菌粘附到基底对于形成明确的生物膜是重要的。 在这里，我们提出了一种方法来设计细菌，使其在蓝光下通过光可切换蛋白质nMag和pMag特异性地粘附在基底上。 这为这些交互提供了精妙的时空遥控。 工程菌在表面上表达pMag蛋白，以便它们可以在蓝光下与nMag蛋白固定化的基质粘附，并在黑暗中可逆地分离。 该过程可以重复开启和关闭。 此外，通过在细菌表面表达不同的pMag蛋白质并改变光强度可以调节细菌粘附性质。 该协议提供了可高度空间和时间分辨率的细菌粘附的光可切换，可逆和可调控制，这使我们能够以极大的灵活性在基底上图案化细菌。
【背景】控制生物膜形成对于了解细菌在自然发生的生物膜中的社会相互作用至关重要（Flemming et。，2016）。这对生物膜在生物催化，生物传感和废物处理中的生物技术应用也特别重要（Zhou等人，2013; Jensen等人，2016）。生物膜的形成始终始于细菌与底物的粘附，这决定了生物膜中的空间组织（Liu等人，2016; Nadell等人，2016）。已经提出了许多策略来控制细菌粘附，例如通过脂质体融合利用生物正交反应基团修饰细菌表面（Elahipanah等，2016），将粘附分子固定在基质上（Sankaran等，等），2015; Zhang等人，2016; ...
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