| Measurement of Dopamine Using Fast Scan Cyclic Voltammetry in Rodent Brain Slices
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Author:
Date:
2018-10-05
[Abstract] Fast scan cyclic voltammetry (FSCV) is an electrochemical technique that allows sub-second detection of oxidizable chemical species, including monoamine neurotransmitters such as dopamine, norepinephrine, and serotonin. This technique has been used to record the physiological dynamics of these neurotransmitters in brain tissue, including their rates of release and reuptake as well as the activity of neuromodulators that regulate such processes. This protocol will focus on the use of ex vivo FSCV for the detection of dopamine within the nucleus accumbens in slices obtained from rodents. We have included all necessary materials, reagents, recipes, procedures, and analyses in order to successfully perform this technique in the laboratory setting. Additionally, we have also included ...
[摘要] 快速扫描循环伏安法（FSCV）是一种电化学技术，可以亚秒检测可氧化的化学物质，包括单胺类神经递质，如多巴胺，去甲肾上腺素和血清素。 该技术已被用于记录这些神经递质在脑组织中的生理动态，包括它们的释放和再摄取速率以及调节这些过程的神经调节剂的活性。 该方案将集中于使用离体 FSCV检测从啮齿动物获得的切片中的伏隔核内的多巴胺。 我们已经包含了所有必要的材料，试剂，配方，程序和分析，以便在实验室环境中成功地执行该技术。 此外，我们还提供了一些警示点，我们认为这些警告点对于那些在该领域的新手有帮助。
【背景】由于首先将用于检查生理系统的电特性的能力用于临床前科学研究，因此已经开发了许多用于研究突触生理学的技术。从鱿鱼轴突电生理记录的早期到现在的快速扫描循环伏安法（FSCV）在人类帕金森病患者中进行（Kishida et al。，2016; Lohrenz et al。，2016），该领域在相对较短的时间内取得了重大进展。该协议的重点是FSCV，是物理学家，分析化学家和神经科学家之间40多年的创新和合作的技术成果。早在19世纪（Bard和Zoski，2000年），电化学与Michael Faraday和Alessandro Volta一起诞生（Bard and Zoski，2000），直到20世纪20年代，Jaroslav ...
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| Preparation of Amyloid Fibril Networks
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Author:
Date:
2018-02-20
[Abstract] Networks of amyloid nanofibrils fabricated from common globular proteins such as lysozyme and β-lactoglobulin have material properties that mimic the extracellular microenvironment of many cell types. Cells cultured on such amyloid fibril networks show improved attachment, spreading and in the case of mesenchymal stem cells improved differentiation. Here we describe a detailed protocol for fabricating amyloid fibril networks suitable for eukaryotic cell culture applications.
[摘要] 结核分枝杆菌（Mtb）已经发展为从其宿主同化脂肪酸。然而，直到最近，还没有可靠的方法来量化宿主细胞感染期间细菌对脂肪酸的摄取。在这里，我们描述了一种新的方法来量化细胞内的杆菌对脂肪酸的摄取。我们用Mtb组成性表达mCherry感染巨噬细胞，然后用Bodipy-palmitate代谢标记它们。在标记步骤之后，我们在蔗糖垫上分离含有Mtb的吞噬体，并用洗涤剂破坏吞噬体。大量洗涤后，通过流式细胞术分析分离的细菌以确定与细菌相关的Bodipy-棕榈酸酯信号的水平。使用液体培养物中脂肪酸摄取缺陷的Mtb突变体菌株，我们确定该突变体在巨噬细胞感染期间同化比野生型菌株少10倍的Bodipy-棕榈酸酯。这种脂肪酸摄取的定量方法可以用于进一步鉴定参与细胞内Mtb和可能的其他细菌的脂质摄取的途径。
【背景】结核分枝杆菌（Mtb）吸收宿主来源的脂质（脂肪酸和胆固醇）的能力使病原体能够在其宿主内存活（Russell等人，2010; Lovewell 等，2016）。在小鼠感染期间和在人肺组织中，通过巨噬细胞内Mtb上调胆固醇和脂肪酸代谢相关基因来支持这个想法（Schnappinger等人，2003; Rachman等人。2006; Rohde等人，2007;Fontán等人，2008; Tailleux等人，2008; Homolka et al。，2010; Rohde et ...
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| Metabolite and Fatty Acid Analysis of Yeast Cells and Culture Supernatants
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Author:
Date:
2014-09-05
[Abstract] Metabolite and fatty acid analysis play important roles in evaluating the metabolic state of microorganisms. To examine the growth state and metabolism response of cells to environmental stress or genetic modification, intracellular and extracellular metabolites including fatty acids are usually analyzed to help understand the cellular biochemical changes in microorganisms. In this protocol, gas chromatography-mass spectrometry based analysis was employed to investigate the fatty acids and other metabolites in yeast cells.
[摘要] 代谢物和脂肪酸分析在评估微生物的代谢状态中起重要作用。 为了检查细胞对环境胁迫或遗传修饰的生长状态和代谢反应，通常分析细胞内和细胞外代谢物（包括脂肪酸）以帮助理解微生物中的细胞生物化学变化。 在本协议中，采用基于气相色谱 - 质谱法的分析来研究酵母细胞中的脂肪酸和其他代谢物。
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