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Company: USA Scientific

Catalog#: 1121-3810

Generation of Human Induced Pluripotent Stem Cell (hiPSC)-Derived Astrocytes for Amyotrophic Lateral Sclerosis and Other Neurodegenerative Disease Studies

Katarina Stoklund Dittlau, Abinaya Chandrasekaran, Kristine Freude and Ludo Van Den Bosch

Published online: 2024-02-20

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Karyopherin-β2 Inhibits and Reverses Aggregation and Liquid-liquid Phase Separation of the ALS/FTD-Associated Protein FUS

Author:

Emma Robinson, James Shorter and Lin Guo,

Date:

2020-08-20

[Abstract] The study of RNA-binding proteins (RBP) offers insight into the mechanisms of pathologic protein aggregation in neurodegenerative diseases. We developed a protocol for purifying an RBP FUS and a nuclear import receptor (NIR) Kapβ2 and testing the ability of Kapβ2 to mitigate FUS aggregation and liquid-liquid phase separation. [摘要] [摘要] RNA结合蛋白的研究（RBP）报价洞察病理蛋白聚集的神经变性疾病的机制。我们开发了用于纯化RBP FUS和核输入受体（NIR）Kapβ2 的协议，并测试Kapβ2 减轻FUS聚集和液-液相分离的能力。

[背景] 肌萎缩性脊髓侧索硬化症（ALS）和额颞叶痴呆（FTD）是神经变性疾病，其特征在于所述错误定位几个RNA结合蛋白的和聚集（RBP）（麦肯齐等人，2010;达克鲁斯和克利夫兰，2011； King 等，2012）。其中一种蛋白是FUS（融合在肉瘤中），一种核蛋白在ALS / FTD患者的神经元细胞质中定位不正确，然后经历液-液相转变，然后发生异常的相转变，形成不溶性聚集体（Altmeyer 等， 2015; Burke 等人，2015; Lin 等人，2015; Molliex 等人，2015; Murakami 等人，2015; Patel 等人，2015）（图1）。Karyopherin-β2（甲β2），一个核输入受体（NIR），已经建立了作为伴侣和disaggregase 蛋白与PY-核定位序列（NLS），诸如FUS（过等人，2018; Hofweber 等人。，2018;吉泽，等人。，2018）。以下方案被开发，以测试的能力甲β2抑制和反向FUS聚合和相分离的离体（过等人，2018）。

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Transcytosis Assay for Transport of Glycosphingolipids across MDCK-II Cells

Author:

Maria Daniela Garcia-Castillo, Wayne I. Lencer and Daniel J.-F. Chinnapen,

Date:

2018-10-20

[Abstract] Absorption and secretion of peptide and protein cargoes across single-cell thick mucosal and endothelial barriers occurs by active endocytic and vesicular trafficking that connects one side of the epithelial or endothelial cell (the lumen) with the other (the serosa or blood). Assays that assess this pathway must robustly control for non-specific and passive solute flux through weak or damaged intercellular junctions that seal the epithelial or endothelial cells together. Here we describe an in vitro cell culture Transwell assay for transcytosis of therapeutic peptides linked covalently to various species of the glycosphingolipid GM1. We recently used this assay to develop technology that harnesses endogenous mechanism of lipid sorting across epithelial cell barriers to enable ... [摘要] 单细胞厚粘膜和内皮屏障上的肽和蛋白质货物的吸收和分泌通过活性内吞和囊泡运输发生，其连接上皮细胞或内皮细胞（管腔）的一侧与另一侧（浆膜或血液）。评估该途径的测定必须通过弱的或受损的细胞间连接强有力地控制非特异性和被动的溶质通量，所述细胞间连接将上皮细胞或内皮细胞密封在一起。在这里，我们描述了一种体外>细胞培养Transwell测定法，用于与各种鞘糖脂GM1共价连接的治疗性肽的转胞吞作用。我们最近使用该测定开发了技术，该技术利用跨上皮细胞屏障的脂质分选的内源机制，以实现肽和蛋白质治疗剂的口服递送。

【背景】
大分子穿过覆盖粘膜表面的单细胞厚的上皮屏障和衬在供给心肌和脑的血管的紧密内皮屏障上的运输通过内吞过程发生，该内吞过程将这些极化细胞的一侧与另一侧连接。该过程称为转胞吞作用（Garcia-Castillo et al。>，2017）。通过受体介导的内吞作用和穿过消化道和呼吸道粘膜的囊泡运输的免疫球蛋白的吸收和分泌最着名的是这一过程。对转胞吞作用的兴趣也受到利用该途径在紧密上皮和内皮屏障上递送治疗性肽和蛋白质的潜力的刺激（Thuenauer 等人，>，2017）。

转胞吞作用是一种活跃的（ATP驱动的）过程。在一些情况下，通过细胞间紧密连接在细胞周围被动扩散可以发生大分子跨越紧密上皮和内皮屏障的转运（Fung ...

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