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Date:
2018-05-05
[Abstract] Autophagy is a key player in the maintenance of cellular homeostasis in eukaryotes, and numerous diseases, including cancer and neurodegenerative disorders, are associated with alterations in autophagy. The interest for studying autophagy has grown intensely in the last two decades, and so has the arsenal of methods utilised to study this highly dynamic and complex process. Changes in the expression and/or localisation of autophagy-related proteins are frequently assessed by Western blot and various microscopy techniques. Such analyses may be indicative of alterations in autophagy-related processes and informative about the specific marker being investigated. However, since these proteins are part of the autophagic machinery, and not autophagic cargo, they cannot be used to draw ...
[摘要] 自噬是维持真核生物细胞稳态的关键因素，包括癌症和神经退行性疾病在内的许多疾病都与自噬的改变有关。研究自噬的兴趣在过去的二十年里急剧增长，并且还有用于研究这种高度动态和复杂过程的方法库。通常通过Western印迹和各种显微镜技术来评估自噬相关蛋白的表达和/或定位中的变化。这样的分析可能表明自噬相关过程的改变，并且关于正在研究的特定标记物的信息。然而，由于这些蛋白质是自噬机制的一部分，而不是自噬性货物，所以它们不能用于得出关于自噬载货流量的结论。在这里，我们提供了一个协议，通过使用长寿命的蛋白质降解测定来定量评估体积自噬流量。我们的程序追踪14 C缬氨酸标记的蛋白质的降解是简单和快速的，允许并行处理相对大量的样品，并且原则上可以与任何贴壁细胞一起使用线。最重要的是，它可以通过自噬途径定量测量内源货物流量。因此，它是研究自噬活动的黄金标准之一。
【背景】脉冲追踪标记方法已用于研究蛋白质周转数十年。在此处描述的长寿命蛋白质降解（LLPD）测定中，培养细胞的蛋白质组用14 ...
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