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Streptavidin, Alexa Fluor 488

Company: Thermo Fisher Scientific
Catalog#: S32354
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Vascular Permeability Assay in Human Coronary and Mouse Brachiocephalic Arteries
Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract]  Coronary artery disease remains an important cause of morbidity and mortality. Previous work, including ours, has focused on the role of intraplaque hemorrhage, particularly from immature microvessel angiogenesis, as an important contributor to plaque progression via increases in vascular permeability leading to further intraplaque hemorrhage, which increases red cell membrane-derived free cholesterol in plaque content and inflammatory cell recruitment. Evans Blue Dye (EBD) assay is widely used as a standard assay for vasculature permeability. However, the method has not been established in fresh human coronary artery autopsy samples to evaluate intraplaque microvessel permeability and angiogenesis. In this protocol, we describe a method to evaluate human coronary samples for ... [摘要]  冠状动脉疾病仍然是发病率和死亡率的重要原因。以前的研究,包括我们的研究,都集中在斑块内出血的作用,特别是来自未成熟的微血管血管生成,作为斑块进展的重要因素,通过增加血管通透性导致进一步的斑块内出血,增加斑块中红细胞膜来源的游离胆固醇内容和炎症细胞募集。 Evans Blue Dye(EBD)测定法广泛用作脉管系统渗透性的标准测定法。然而,该方法尚未在新鲜人冠状动脉尸检样本中建立,以评估斑块内微血管通透性和血管生成。在该方案中,我们描述了评估人类冠状动脉样本的微血管通透性的方法,包括灌注冠状动脉的程序,用于组织学分析和免疫染色的动脉样本的收集以及使用适当的方法来分析图像。还提供了在小鼠模型中使用FITC-葡聚糖以评估血管通透性的任选程序。这些Evans Blue Dye程序可用于在各种病理条件下提供人样品和动物模型中内皮完整性和渗透性的功能测量。

【背景】
血管内皮细胞主动调节血浆成分和循环细胞(包括白细胞)从血液到亚内皮组织的浸润。这种机制通常被认为是动脉粥样硬化起始和发展的关键步骤(Mundi et al。>,2018)。血管通透性的调节通过内皮细胞 - 细胞连接的协调打开和闭合来实现。在几种疾病状态下,内源性药物如组胺,凝血酶和血管内皮生长因子(VEGF)显着但可逆地以不同方式改变细胞 - ...

CRISPR-mediated Tagging with BirA Allows Proximity Labeling in Toxoplasma gondii
Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract]  Defining protein interaction networks can provide key insights into how protein complexes govern complex biological problems. Here we define a method for proximity based labeling using permissive biotin ligase to define protein networks in the intracellular parasite Toxoplasma gondii. When combined with CRISPR/Cas9 based tagging, this method provides a robust approach to defining protein networks. This approach detects interaction within intact cells, it is applicable to both soluble and insoluble components, including large proteins complexes that interact with the cytoskeleton and unique microtubule organizing center that comprises the apical complex in apicomplexan parasites. [摘要]  定义蛋白质相互作用网络可以为蛋白质复合物如何控制复杂的生物学问题提供关键信息 在这里我们定义了一种基于接近度的标记方法,使用宽容的生物素连接酶来定义细胞内寄生虫弓形虫的蛋白质网络。 当与基于CRISPR / Cas9的标记结合使用时,这种方法提供了一种可靠的方法来定义蛋白质网络。 这种方法检测完整细胞内的相互作用,它适用于可溶性和不可溶性成分,包括与细胞骨架相互作用的大型蛋白质复合物和独特的微管组织中心,其中包括顶尖复合体在顶尖复合寄生虫中。

【背景】分析蛋白质 - 蛋白质相互作用是解决蛋白质如何组装和作为大分子复合物的关键努力。传统上,通过免疫共沉淀(共-IP)和随后的质谱分析已经鉴定出蛋白质复合物。然而,一些蛋白质复合物取代基可能在co-IP的裂解,下拉和洗涤步骤期间人为失去或获得,这对于不溶性膜或需要侵蚀性溶解的结构蛋白质尤其成问题。作为co-IP的替代物,邻近依赖性生物素鉴定(BioID)提供了在正常细胞稳态期间紧邻目标靶蛋白的蛋白质“快照”(Roux等人,2012年)。 BioID利用融合到感兴趣的靶蛋白的混杂的大肠杆菌生物素蛋白连接酶(BirA)。生物素补充使得BirA融合物在30纳米内允许生物素化的近邻生物体(Roux et al。,2012; Van Itallie et al。,2013) ...

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