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Date:
2018-04-05
[Abstract] Mitochondrial function is altered in various pathologies, highlighting the crucial role mitochondria plays in maintaining cellular homeostasis. Mitochondrial structure undergoes constant fission and fusion in response to changing cellular environment. Due to this, analyzing mitochondrial structure could provide insight into the physiological state of the cell. In this protocol, we describe a method to analyze mitochondrial structure in body wall muscles in the nematode Caenorhabditis elegans, using both transgenic and dye-based approaches.
[摘要] 线粒体功能在各种病理学中被改变，突出了线粒体在维持细胞稳态方面发挥的关键作用。 线粒体结构响应不断变化的细胞环境而经历不断的分裂和融合。 因此，分析线粒体结构可以提供对细胞生理状态的了解。 在这个协议中，我们描述了一种使用转基因和基于染料的方法来分析线虫秀丽隐杆线虫体壁细胞线粒体结构的方法。
【背景】线粒体参与ATP产生，细胞呼吸，钙缓冲和反应性氧化物（ROS）代谢（Brookes等人，2004）。线粒体结构和功能是动态和紧密联系的，因此分析线粒体结构可以为线粒体健康状况提供线索（Sarasija and Norman，2015）。我们制定了两套方案来评估秀丽隐杆线虫体壁细胞的线粒体结构。在第一个方案中，我们使用了转基因的ccIs4251株，其中GFP靶向体壁细胞线粒体的基质以显现线粒体（Fire等人，1998） 。在第二种方案中，我们使用线粒体靶向染料，MitoTracker TM Red CMXRos和四甲基罗丹明乙酯（TMRE）来测定体壁肌肉线粒体的结构完整性。通常，用于体内成像的动物是麻醉的，然而麻醉动物可能导致线粒体形态改变（Han等人，2012），使数据分析变得复杂。我们的协议允许活体非麻醉线虫体内线粒体结构的体内成像。
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