| Generation of Human Mesenchymal Stem Cell 3D Spheroids Using Low-binding Plates
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] The 3D culture of human mesenchymal stem cells (hMSCs) represents a more physiological environment than classical 2D culture and has been used to enhance the MSC secretome or extend cell survival after transplantation. Here we describe a simple and affordable method to generate 3D spheroids of hMSCs by seeding them at high density in a low-binding 96-well plate.
Spheroids of hMSCs cultured in low-binding 96-well plates can be used to study the basic biology of the cells and to generate conditioned media or spheroids to be used in transplantation therapeutic approaches. These MSCs or their secretome can be used as a regenerative therapy and for tissue repair across multiple disease areas, including neurodegeneration.
In comparison to other methods (hanging drop, use ...
[摘要] 人间充质干细胞（hMSC）的3D培养代表比经典2D培养更生理的环境，并且已经用于增强MSC分泌组或移植后延长细胞存活。 在这里，我们描述了一种简单且经济实惠的方法，通过在低密度96孔板中高密度接种hMSC来生成三维球状体。
在低结合96孔板中培养的hMSC的球状体可用于研究细胞的基本生物学并产生用于移植治疗方法的条件培养基或球状体。 这些MSC或其分泌蛋白组可用作再生疗法和用于多个疾病区域的组织修复，包括神经变性。
与其他方法（悬滴，使用凝胶或生物材料，磁悬浮，等）相比，此处描述的方法简单且经济实惠，无需使用专用设备，昂贵材料或复杂试剂。
【背景】 间充质干细胞（MSCs）是开发针对中风或肌萎缩侧索硬化等疾病的新型再生疗法的有吸引力的候选者（Chen et al。，2001; Bang et al。，2005; Boido et al。，2014）。它们的多功能性使得技术的优化和标准化对于确保MSC疗法可以提供尽可能多的益处是必不可少的。使MSC的治疗潜力（例如，增强的抗炎介质分泌）最大化的一种可能方式是以3D方式培养它们（Bartosh ...
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| An in vitro Co-culture System for the Activation of CD40 by Membrane-presented CD40 Ligand versus Soluble Agonist
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] One fundamental property of the TNR receptor (TNFR) family relates to how ‘signal quality’ (the extent of receptor ligation or cross-linking) influences the outcome of receptor ligation, for instance the induction of death in tumour cells. It is unequivocal that membrane-presented ligand (delivered to target cells via cell-surface presentation by co-culture with ligand-expressing third-party cells) induces a greater extent of carcinoma cell death in vitro in comparison to non-cross-linked agonists (agonistic antibodies and/or recombinant ligands). The CD40 receptor epitomises this fundamental property of TNF receptor-ligand interactions, as the extent of CD40 cross-linking dictates cell fate. Membrane-presented CD40 ligand (mCD40L), but not soluble agonists (e.g., ...
[摘要] TNR受体（TNFR）家族的一个基本特性涉及“信号质量”（受体连接或交联的程度）如何影响受体连接的结果，例如肿瘤细胞中的死亡诱导。毫无疑问，膜呈递配体（通过与表达配体的第三方细胞共培养通过细胞表面呈递递送至靶细胞）在体外诱导更大程度的癌细胞死亡非交联激动剂（激动性抗体和/或重组配体）。 CD40受体集中体现了TNF受体 - 配体相互作用的这种基本特性，因为CD40交联的程度决定了细胞命运。膜呈递CD40配体（mCD40L），但不是可溶性激动剂（例如，激动性抗CD40抗体），诱导高水平的促炎细胞因子分泌并导致恶性肿瘤细胞广泛死亡（细胞凋亡）但不是正常的）上皮细胞。在本文中，我们描述了通过mCD40L激活CD40并随后检测细胞凋亡的各种特征（包括细胞膜透化，DNA片段化，半胱天冬酶活化）以及细胞内细胞死亡介质检测的共培养系统（包括衔接蛋白，促凋亡激酶和活性氧，ROS）。
【背景】TNFR及其配体在调节淋巴组织以及上皮（尤其是癌）细胞中的细胞增殖或死亡中的作用已经在广泛研究中，因为它们诱导细胞死亡（主要通过细胞凋亡）的能力代表了有希望的目标。用于癌症治疗。然而，重要的是，当以可溶性对膜结合形式存在时，TNFR激动剂引发细胞死亡的能力存在明显差异。当作为单独治疗施用时，可溶性激动剂通常表现出相对低的细胞毒性效力，而膜呈递的配体似乎是优越的（Albarbar ...
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