| Long-term in vitro Culture of Cryptosporidium parvum
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Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] Continuous in vitro growth of Cryptosporidium parvum has proved difficult and conventional in vitro culture techniques result in short-term (2-5 days) growth of the parasite resulting in thin-walled oocysts that fail to propagate using in vitro cultures, and do not produce an active infection using immunosuppressed or immunodeficient mouse models (Arrowood, 2002). Here we describe the use of hollow fiber bioreactors (HFB) that simulate in vivo conditions by providing oxygen and nutrients to host intestinal cells from the basal surface and permit the establishment of a low redox, high nutrient environment on the apical surface. When inoculated with 105 C. parvum (Iowa isolate) oocysts the bioreactor produced 108 ...
[摘要] Cryptosporidium parvum 的连续体外生长已证明是困难的，并且常规体外培养技术导致短期（2-5天）生长寄生虫导致薄壁卵囊不能使用体外培养物繁殖，并且不使用免疫抑制或免疫缺陷小鼠模型产生活跃感染（Arrowood，2002）。在这里，我们描述了中空纤维生物反应器（HFB）的使用，通过提供氧气和营养物质从基础表面宿主肠细胞模拟体内条件，并允许建立低氧化还原，高营养环境顶面。当接种10 5 C时。 parvum （爱荷华州分离物）卵囊生物反应器在14天后每ml产生10个 8 卵囊（20ml额外毛细血管体积），并保持2年以上。使用TCR-α免疫缺陷小鼠模型的体内感染性研究显示，在6,12和18个月时从生物反应器产生的卵囊与用于启动培养的亲本Iowa分离物无法区分。 HFB产生的卵囊具有与亲本爱荷华分离物类似的百分比分析。
【背景】 Cryptosporidium parvum 是人和其他哺乳动物肠道的细胞内专性寄生虫，导致急性腹泻。该疾病在免疫功能正常的个体中是自限性的，然而，在免疫功能低下的成人和幼儿中，该疾病可能危及生命（Kotloff，2017）。它是经济资源低的国家中三种被诊断出的儿童肠道疾病之一（Kotloff et al。，2013; Sow et ...
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| Ex vivo Whole-cell Recordings in Adult Drosophila Brain
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Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract] Cost-effective and efficient, the fruit fly (Drosophila melanogaster) has been used to make many key discoveries in the field of neuroscience and to model a number of neurological disorders. Great strides in understanding have been made using sophisticated molecular genetic tools and behavioral assays. Functional analysis of neural activity was initially limited to the neuromuscular junction (NMJ) and in the central nervous system (CNS) of embryos and larvae. Elucidating the cellular mechanisms underlying neurological processes and disorders in the mature nervous system have been more challenging due to difficulty in recording from neurons in adult brains. To this aim we developed an ex vivo preparation in which a whole brain is isolated from the head capsule of an adult ...
[摘要] 果蝇（ Drosophila melanogaster ）具有成本效益和效率，已被用于在神经科学领域进行许多重要发现并模拟许多神经疾病。使用复杂的分子遗传工具和行为测定已经在理解方面取得了很大进展。神经活动的功能分析最初仅限于神经肌肉接头（NMJ）和胚胎和幼虫的中枢神经系统（CNS）。阐明成熟神经系统中神经过程和病症潜在的细胞机制由于难以从成人大脑中的神经元记录而更具挑战性。为此目的，我们开发了一种离体制剂，其中从成年蝇的头部胶囊中分离出全脑并将其置于记录室中。通过这种制备，可以将成年大脑中鉴定的神经元的全细胞记录与遗传，药理学和环境操作相结合，以探索神经元功能和功能障碍的细胞机制。它还作为评估通过用于治疗神经疾病的行为测定法鉴定的新疗法的作用机制的重要平台。在这里，我们提出了成人 Drosophila 脑中离体制剂和全细胞记录的方案。
【背景】果蝇（ Drosophila melanogaster ）已被用于在神经科学的各个基本领域（包括学习和记忆）中取得重要发现（Bolduc et al。，2008; Cervantes- Sandoval et al。，2016），突触形成和调节（Genç et al。，2017）和昼夜节律（Allada et al。 ，1998; Guo et ...
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| Assessment of Modulation of Protein Stability Using Pulse-chase Method
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] Pulse-chase technique is a method widely used to assess protein or mRNA stability. The principle of pulse-chase relies on labeling proteins or mRNA produced during a short period of time called ‘pulse’ and then following the rate of disappearance of those labeled proteins over a period of time called ‘chase’. This technique thus allows quantitative analysis of modulation of protein or mRNA stability under different treatments or culturing conditions.
[摘要] 脉冲追踪技术是广泛用于评估蛋白质或mRNA稳定性的方法。 脉冲追踪的原理依赖于在短时间内产生的称为“脉冲”的蛋白质或mRNA的标记，然后遵循称为“追逐”的时间段内那些标记蛋白质的消失速率。 因此，该技术允许在不同处理或培养条件下对蛋白质或mRNA稳定性的调节进行定量分析。
【背景】脉冲追踪技术是一种方法，其涉及在称为“脉冲”的短时间内在含有标记氨基酸的培养基中培养细胞。这导致结合标记的氨基酸的新合成的多肽的产生。脉冲步骤之后是“追逐”步骤，其中洗涤标记培养基以终止标记过程，并被具有非标记氨基酸的培养基代替，以允许在任何给定时间定量初始合成的放射性标记的蛋白质在这个追逐阶段。因此，该技术可以及时地从合成到降解的方法定量分析感兴趣的蛋白质的加工。脉冲追踪方法可用于分析蛋白质折叠，共翻译修饰和细胞内运输等各种过程（Jansens和Braakman 2003;Magadán，2014）。然而，脉冲追踪技术最常用于评估不同实验条件下蛋白质的稳定性。
放射性是常用的标签。标签通常用于使用放射性S35甲硫氨酸的蛋白质。放射性标记的蛋白质的消失动力学依赖于这些蛋白质降解的速度，可以用来检验不同实验条件对蛋白质稳定性的影响。为了评估特定目的蛋白质的稳定性，该蛋白质在使用特异性抗体在脉冲期间产生的所有其它免疫标记的蛋白质免疫沉淀。免疫沉淀将分离在脉冲期间产生并且直到免疫沉淀时尚未降解的放射性标记的蛋白质的比例。然后测量放射性以评估标记蛋白质在一段时间内的相对量。 ...
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