| Imaging of Human Cancer Cells in 3D Collagen Matrices
|
|
Author:
Date:
2021-01-20
[Abstract] Research on cell migration and interactions with the extracellular matrix (ECM) was mostly focused on 2D surfaces in the past. Many recent studies have highlighted differences in migratory behaviour of cells on 2D surfaces compared to complex cell migration modes in 3D environments. When embedded in 3D matrices, cells constantly sense the physicochemical, topological and mechanical properties of the ECM and adjust their behaviour accordingly. Changes in the stiffness of the ECM can have effects on cell morphology, differentiation and behaviour and cells can follow stiffness gradients in a process called durotaxis. Here we introduce a detailed protocol for the assembly of 3D matrices consisting of collagen I/fibronectin and embedding cells for live cell imaging. Further, we will show how ...
[摘要] [摘要]细胞迁移及其与细胞外基质（ECM）相互作用的研究最多过去专注于2D曲面。最近的许多研究都强调了与3D环境中复杂的细胞迁移模式相比，2D表面上的细胞迁移行为的差异。当嵌入3D矩阵中时，细胞会不断感知ECM的物理化学，拓扑和机械特性，并相应地调整其行为。ECM刚度的变化会影响细胞的形态，分化和行为，并且细胞会在称为durotaxis的过程中遵循刚度梯度。在这里，我们介绍了由胶原蛋白I /纤连蛋白和包埋细胞组成的3D矩阵的详细协议，用于活细胞成像。此外，我们将展示如何通过非酶糖基化来增强基质，以及用荧光染料对胶原蛋白进行染色如何使基质和细胞同时成像。该方法可用于在具有不同刚度的3D微环境中对细胞迁移进行成像，定义细胞-基质相互作用以及细胞对变化的ECM的反应，并可视化细胞的基质变形。
[背景]细胞和依赖于动态周围的细胞外基质（ECM）生成的功能性实体的调整两者的，基质和细胞，以预防疾病。多年来，人们一直认为ECM仅为嵌入式细胞提供结构支持。但是，最近的研究突出了ECM的关键功能，而不是其脚手架功能。ECM的修饰已与疾病进展相关，尤其是在癌症的背景下，与转移的发生有关，以及与临床预后和患者生存的相关性。
...
|
|
|
| Isolation of Extracellular Vesicles Derived from Mesenchymal Stromal Cells by Ultracentrifugation
|
|
Author:
Date:
2020-12-20
[Abstract] Extracellular vesicles (EVs) are a heterogeneous group of membranous vesicles that differ on their biogenesis and release pathways, such as exosomes, microvesicles and apoptotic bodies. They are involved in cell-to-cell communication delivering signal molecules (proteins, nucleic acids, lipids, etc.) that can regulate different physiological processes, as well as the development and progression of several diseases. There are different methods and commercial kits to isolate EVs and depending on the methodology one could obtain EVs with different degrees of efficiency, purity and it can be more or less time-consuming. Then, the choice has to be according to the different advantages and disadvantages, and their use for downstream applications. Here, we describe the EVs isolation ...
[摘要] [摘要]细胞外囊泡（EV多个），关于它们的生物合成和释放途径不同膜囊泡的一组异质小号，诸如外来体，微泡和凋亡小体。它们参与细胞间传递信号的信号分子（蛋白质，核酸，脂质等），这些信号分子可调节不同的生理过程以及几种疾病的发生和发展。分离电动汽车有不同的方法和商业工具包，根据方法学的不同，人们可以获得具有不同程度的效率，纯度的电动汽车，这或多或少会耗时。然后，必须根据不同的优缺点及其在下游应用中的用途进行选择。在这里，我们描述了通过超速离心从间充质基质细胞分离电动汽车的方法。可以使用通用培养基和缓冲液进行电动汽车隔离，并且仅需要分析型超速离心机即可。此外，该方法可用于获得电动车的大量再现性良好发展体外和体内实验，研究它们的生物学作用小号。
[背景]间充质干细胞（MSCs）对不同疾病的进展具有保护作用，有助于免疫调节和炎症状态（Bartholomew等，2002； Togel等，2005； Azmi等，2013； Ebrahimi等人，2013； Ben-Ami等人，2014）。它们的保护作用不仅归因于它们的转分化作用，还归因于它们的旁分泌机制，例如释放出具有免疫调节，抗炎，抗凋亡和促血管生成功能的细胞外小泡（EV）（Bruno等，2009； Camussi等）。 。，2010一个;农庄。等人，2020） ...
|
|
|
| Generation of Human Mesenchymal Stem Cell 3D Spheroids Using Low-binding Plates
|
|
Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] The 3D culture of human mesenchymal stem cells (hMSCs) represents a more physiological environment than classical 2D culture and has been used to enhance the MSC secretome or extend cell survival after transplantation. Here we describe a simple and affordable method to generate 3D spheroids of hMSCs by seeding them at high density in a low-binding 96-well plate.
Spheroids of hMSCs cultured in low-binding 96-well plates can be used to study the basic biology of the cells and to generate conditioned media or spheroids to be used in transplantation therapeutic approaches. These MSCs or their secretome can be used as a regenerative therapy and for tissue repair across multiple disease areas, including neurodegeneration.
In comparison to other methods (hanging drop, use ...
[摘要] 人间充质干细胞（hMSC）的3D培养代表比经典2D培养更生理的环境，并且已经用于增强MSC分泌组或移植后延长细胞存活。 在这里，我们描述了一种简单且经济实惠的方法，通过在低密度96孔板中高密度接种hMSC来生成三维球状体。
在低结合96孔板中培养的hMSC的球状体可用于研究细胞的基本生物学并产生用于移植治疗方法的条件培养基或球状体。 这些MSC或其分泌蛋白组可用作再生疗法和用于多个疾病区域的组织修复，包括神经变性。
与其他方法（悬滴，使用凝胶或生物材料，磁悬浮，等）相比，此处描述的方法简单且经济实惠，无需使用专用设备，昂贵材料或复杂试剂。
【背景】 间充质干细胞（MSCs）是开发针对中风或肌萎缩侧索硬化等疾病的新型再生疗法的有吸引力的候选者（Chen et al。，2001; Bang et al。，2005; Boido et al。，2014）。它们的多功能性使得技术的优化和标准化对于确保MSC疗法可以提供尽可能多的益处是必不可少的。使MSC的治疗潜力（例如，增强的抗炎介质分泌）最大化的一种可能方式是以3D方式培养它们（Bartosh ...
|
|
|