| Image-Based Analysis of Mitochondrial Area and Counting from Adult Mouse Dopaminergic Neurites
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Mitochondria form dynamic cytoplasmic networks which undergo morphological changes in order to adapt to cellular stresses and signals. These changes can include alterations in size and number within a given cell. Analysis of the whole network can be a useful metric to assess overall mitochondrial health, particularly in neurons, which are highly sensitive to mitochondrial dysfunction. Here we describe a method which combines immunofluorescence and computerized image analysis to measure mitochondrial morphology (quantification of number, density, and area) in dopaminergic neurites of mice expressing mitochondrially-targeted eYFP.
[摘要] 线粒体形成动态细胞质网络，其经历形态变化以适应细胞应激和信号。 这些变化可以包括给定单元内的大小和数量的改变。 分析整个网络可以是评估整体线粒体健康的有用指标，特别是在对线粒体功能障碍高度敏感的神经元中。 在这里，我们描述了一种方法，它结合免疫荧光和计算机图像分析，以测量表达线粒体靶向eYFP的小鼠的多巴胺能神经突的线粒体形态（数量，密度和面积的量化）。
【背景】 线粒体是存在于每个复杂生物的基本上所有细胞中的双膜细胞器。它们的主要功能是提供大部分细胞能量作为ATP，但它们也在细胞凋亡，缓冲细胞内Ca 2 + ，活性氧物质产生和膜电位调节中发挥作用（Neupert和Herrmann， 2007; Hamanaka和Chandel，2010; Shutt和McBride，2013）。
这些细胞器通常被描述为单个“豆状”结构，实际上是动态细胞质网络的组成部分。它们可以经历由膜融合和裂变的动态过程调节的主要形态变化，该过程被认为涉及通过称为线粒体自噬的过程消除功能障碍的细胞器。线粒体网络也可以作为对高细胞能量需求的响应而增加（Sheng，2017; Devine和Kittler，2018）。线粒体网络的形态可以根据不同的应激源而改变，并且存在多种可能的形态，即细胞类型，甚至细胞室依赖性（Picard et al。，2013 ...
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| Assessment of Caenorhabditis elegans Competitive Fitness in the Presence of a Bacterial Parasite
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Accurate measurements of an organism’s fitness are crucial for measuring evolutionary change. Methods of fitness measurement are most accurate when incorporating an individual’s survival and fecundity, as well as accounting for any ecological interactions or environmental effects experienced by the organism. Here, we describe a protocol for measuring the relative mean fitness of Caenorhabditis elegans populations, or strains, through an assay that accounts for individual survival, fecundity, and intraspecific competitive ability in the presence of a bacterial parasite. In this competitive fitness assay nematodes from a focal population or strain are mixed with a GFP-marked tester strain in equal proportions, the mixture of nematodes are then exposed to a parasite, and the ...
[摘要] 准确测量生物体的适应度对于衡量进化变化至关重要。当结合个体的生存和繁殖力以及考虑生物体所经历的任何生态相互作用或环境影响时，适合度测量的方法是最准确的。在这里，我们描述了一种用于测量秀丽隐杆线虫种群或菌株的相对平均适合度的方案，该方案通过在细菌寄生虫存在下计算个体存活率，繁殖力和种内竞争能力的测定。在这种竞争性适应性测定中，来自焦点种群或菌株的线虫与GFP标记的测试菌株以相等比例混合，然后将线虫的混合物暴露于寄生虫，并且通过测量来确定焦点菌株的相对竞争适合度。一代后，焦点线虫与GFP标记的线虫的比例发生变化。具体地，可以实施该协议以通过确定进化线虫与祖先线虫群体的相对竞争适合度来测量实验进化后线虫宿主适应度的变化。
【背景】 准确测量适应度和适应度随时间的变化对于确定群体对自然选择的反应至关重要。尽管如此，健康是众所周知难以衡量的，因为它包含了个人的生存，繁殖力，繁殖时间，并且必须考虑到对个体的生态和环境影响。尽管在所有可能的条件下没有用于测量适合度的协议是最佳的，但是考虑到生存和繁殖力的适应度的测量，同时保持生态和环境影响不变，可能提供对给定场景的适合性的可靠总体估计。在这里，我们描述了一个用于测量 C之间相对适应度差异的协议。线虫种群或菌株，用于确定细菌寄生虫存在时进化时间内相对适合度的变化。我们利用革兰氏阴性细菌粘质沙雷氏菌作为 ...
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| Combinations of Patch-Clamp and Confocal Calcium Imaging in Acutely Isolated Adult Mouse Amygdala Brain Slices
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Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] Calcium imaging is a powerful technique in the study of neuronal physiology, as it avoids the enzyme treatment on neurons and is able to study the neuronal activities in vivo. Using calcium-imaging techniques, we are able to monitor the elevation of calcium in the neuron. Furthermore, we can combine calcium imaging with other methods, like whole-cell patch clamp recordings, to detect a single cell calcium signal in brain slices. In this protocol, we describe a detailed confocal imaging method that is combined with whole-cell patch clamp configuration using brain slices (Du et al., 2017).
[摘要] 钙成像是神经生理学研究中的一项强有力的技术，因为它避免了对神经元的酶处理，并且能够研究体内的神经元活动。 使用钙成像技术，我们能够监测神经元中钙的升高。 此外，我们可以将钙成像与其他方法结合起来，如全细胞膜片钳记录，以检测脑切片中的单细胞钙信号。 在该协议中，我们描述了一种详细的共焦成像方法，该方法与使用脑切片的全细胞膜片钳配置相结合（Du et al。，2017）。
【背景】几十年来，脑切片已成功用于研究突触，神经元和神经回路。许多实验操作已经应用于脑切片模型，例如药物应用，细胞内记录和光学成像。与培养的神经元相比，脑切片保留了神经元回路的许多基本功能特性。钙成像是一种广泛使用的技术，旨在表明分离的细胞和组织的细胞内钙（Ca 2 + ）状态。研究脑组织中的细胞内钙可以深入了解各种生理过程，如细胞增殖，信号转导，突触可塑性和细胞死亡，因为钙浓度在这些功能中起着关键作用（Cameron et al。，2016）。钙指示剂是一种荧光分子，它与Ca 2 + ...
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