| In vitro Nitrate Reductase Activity Assay from Arabidopsis Crude Extracts
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Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract] Nitrate reductase (NR) reduces the major plant nitrogen source, NO3-, into NO2-. NR activity can be measured by its final product, nitrite through its absorbance under optimized condition. Here, we present a detailed protocol for measuring relative enzyme activity of NR from Arabidopsis crude extracts. This protocol offers simple procedure and data analysis to compare NR activity of multiple samples.
[摘要] 硝酸还原酶（NR）将主要的植物氮源NO 3 N-2还原为NO 2 - 2。 NR活性可以通过其最终产物，亚硝酸盐在最佳条件下通过其吸光度来测量。 在这里，我们提供了一个详细的协议，用于测量来自拟南芥粗提物的NR的相对酶活性。 该协议提供简单的程序和数据分析来比较多个样品的NR活性。
【背景】氮是植物所需的主要营养素，主要以硝酸盐的形式吸收。硝酸还原酶是高等植物中首次同化氮的酶。植物硝酸还原酶的同型二聚体如下催化硝酸根的NAD（P）H依赖性还原为亚硝酸根：
NO <3> + NADH + H +→NO - + NAD + H 测量NR活性的方法可能是研究影响NR活性的生物因素的有力工具（Park等人，2011）。氮同化影响植物中氨基酸的含量，因此调节NR活性可用于提高某些作物的质量（Croy和Hageman，1970; Dalling和Loyn，1977; Ruan等人，1998） ）。在该协议中，在优化的缓冲液条件下限制时间内亚硝酸盐浓度增加作为可比值获得。亚硫酸盐浓度通过Griess测定法通过其在540nm处的吸光度来测量。简言之，亚硝酸盐与磺胺酸形成重氮盐，然后N-（1-萘基）乙二胺二盐酸盐形成有色偶氮化合物。可以比较这些值以确定样品如何具有不同的NR活性。此外，通过简单的过程可以将这些数值转换为精确增加的亚硝酸盐浓度。 ...
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| Activity Assays for Bacteriophage Endolysin PlyPy
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Author:
Date:
2014-09-20
[Abstract] Bacterial viruses (bacteriophages) escape and kill their host by degrading the bacterial peptidoglycan layer through the mechanism of enzymes called endolysins: peptidoglycan degrading enzymes. The method included here is useful for the initial characterization of any endolysin, regardless of the specific catalytic domain (as long as the activity results in a reduction in the optical density), in order to determine its optimal enzymatic (lytic) activity. This protocol is specific for the Streptococcus pyogenes phage endolysin PlyPy, but can be adapted for any peptidoglycan degrading enzyme.
[摘要] 细菌病毒（噬菌体）通过称为内溶素：肽聚糖降解酶的酶的机制降解细菌肽聚糖层而逃脱并杀死它们的宿主。 本文包括的方法可用于任何内溶素的初始表征，而不管具体的催化结构域（只要活性导致光密度降低），以确定其最佳酶（裂解）活性。 该方案对于化脓链球菌噬菌体内溶素PlyPy是特异性的，但可以适用于任何肽聚糖降解酶。
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