Ectopic Gene Expression in Macrophages Using in vitro Transcribed mRNA
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] Macrophages are immune cells that contribute to host defense through various mechanisms including phagocytosis and antigen presentation. Their antimicrobial capacity is subverted by clinically important intracellular pathogens such as Mycobacterium tuberculosis. The study of host-pathogen interactions using these cells is therefore of considerable interest. Such studies often seek to express tagged proteins to characterize their activities, localizations, and protein-protein interactions. Here, we describe a robust method for transient protein expression in macrophages using mRNA lipoplex transfections.
[摘要] 巨噬细胞是通过包括吞噬作用和抗原呈递在内的多种机制促成宿主防御的免疫细胞。 它们的抗菌能力被临床上重要的细胞内病原体诸如结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)所破坏。 因此使用这些细胞进行宿主 - 病原体相互作用的研究具有相当大的意义。 这样的研究通常试图表达标记的蛋白质来表征它们的活性,定位和蛋白质 - 蛋白质相互作用。 在这里,我们描述了使用mRNA脂质复合物转染在巨噬细胞中瞬时蛋白质表达的稳健方法。
【背景】典型的实现蛋白质表达的方法,包括使用阳离子聚合物转染DNA,核转染和病毒转导(Zhang等人,2009)在巨噬细胞中特别困难,因为这些细胞具有对 各种危险信号如胞质DNA。 因此,用于外源基因递送的常规方法导致差的转染效率和细胞死亡。 我们推论,正如最近的报道(Van De Parre等人,2004; McLenachan等人,2004)所述,转染mRNA而不是DNA,将是实现巨噬细胞中蛋白质表达的更好的替代方案 。,2013)。 我们能够实现高转染效率而不损失巨噬细胞活力(Koster等人,2017)。 我们的方法不需要昂贵的设备,可以适应表达外源性和内源性蛋白质。
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RNA Extraction from Wistar Rat Cochlea for qRT-PCR
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Otology research has developed considerably in recent years and molecular analysis is crucial to identify metabolic pathways and therapeutic targets. However, the structure of the cochlea limits the amount of cell mass, and special care is required for RNA extraction. Studies applying this technique to the cochlea are scarce in the literature, and difficulties in this area exist. In the context, we describe a method for extracting RNA in Wistar rats for qRT-PCR analyses in order to clarify certain aspects and obtain good quality material.
[摘要] 近年来,耳科学研究发展迅速,分子分析对鉴定代谢途径和治疗靶点至关重要。 然而,耳蜗的结构限制了细胞的数量,特别注意RNA提取。 在耳蜗中使用这种技术的研究在文献中很少,而且在这方面存在困难。 在此背景下,我们描述了提取Wistar大鼠的RNA进行qRT-PCR分析的方法,以澄清某些方面并获得优质的材料。
【背景】了解涉及毛细胞损伤的分子机制对于保持听力非常重要。 来自mRNA的qRT-PCR用于代谢途径和可能的治疗靶标的研究。 耳科学研究通常使用小型啮齿动物,尽管用保存良好的RNA分离感觉细胞样品用于转录分析是一个重大挑战。 用这些动物进行的研究已经提出了在新生儿耳蜗中提取RNA的有效方法,然而,由于少量mRNA的回收,成年耳蜗呈现局限性。 为了评估获得的RNA的质量,可以进行紫外吸收和琼脂糖凝胶电泳。 在此,我们描述了从成年Wistar大鼠获得mRNA的方法,其随后可用于qRT-PCR测定。
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