| Growth of Chlamydomonas reinhardtii under Circadian Conditions
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] The green biflagellate unicellular alga Chlamydomonas reinhardtii serves as a model to study fundamental biological processes such as the structure and function of flagella or light-driven processes including photosynthesis, its behavioral responses, life cycle and circadian clock. Light-dark, as well as temperature cycles, are major Zeitgebers to entrain the algal circadian clock. In C. reinhardtii, several processes are under circadian control and many clock-controlled genes and/or proteins have been found in the past decades as well as components of the endogenous oscillator. Here, we describe a protocol for the growth of C. reinhardtii for the synchronization and analysis of its circadian clock.
[摘要] 绿色双鞭毛虫单细胞藻莱茵衣藻用作研究基本生物过程的模型，例如鞭毛的结构和功能或光驱动过程，包括光合作用，其行为反应，生命周期和生物钟。 光暗和温度循环是主要的Zeitgebers携带藻类生物钟。 在 C中。 莱茵哈迪，几个过程受到昼夜控制，并且在过去几十年中已发现许多时钟控制的基因和/或蛋白质以及内源性振荡器的组分。 在这里，我们描述了 C增长的协议。 reinhardtii 用于同步和分析其生物钟。
【背景】 在过去几年中， C的几个时钟组件。莱康哈迪已被确定，其功能已经过研究（有关评论，请参阅Schulze et al。，2010; Matsuo和Ishiura，2011; Noordally和Millar，2015; Ryo et al。，2016; Kottke et al。，2017）。在本文中，我们将介绍研究 C中昼夜控制的生长条件。藻。因此，我们介绍了在昼夜和昼夜节律条件下用于藻类细胞生长的时间生物学命名法（图1）。
首先，生物钟通过12小时光照和12小时黑暗的光暗循环同步，在恒定温度下称为LD ...
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| Measurement of Junctional Protein Dynamics Using Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP)
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Author:
Date:
2013-10-20
[Abstract] Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP) (Lippincott-Schwartz et al., 2003; Reits and Neefjes, 2001) was employed to determine dynamic properties of proteins localized at the ephitelial zonula adherens (ZA) (Kovacs et al., 2011; Otani et al., 2006). The proteins of interest were expressed in cells using a knockdown and reconstitution approach in which endogenous proteins were depleted by RNA interference (RNAi) and replaced by expression of an RNAi-resistant gene fused to GFP (Priya et al., 2013; Smutny et al., 2010; Smutny et al., 2011; Vitriol et al., 2007). By choosing expression levels of GFP-tagged proteins that were comparable to endogenous levels, we minimized transient overexpression artifacts due to ...
[摘要] 使用光漂白后的荧光恢复（FRAP）（Lippincott-Schwartz等人，2003; Reits和Neefjes，2001）来确定位于Ephitelial zonula adherens（ZA）处的蛋白质的动力学性质（Kovacs < et="" al。，2011;="" otani="" et="" al。，2006）。使用敲除和重建方法在细胞中表达感兴趣的蛋白质，其中内源蛋白质被rna干扰（rnai）耗尽，并被与gfp融合的rnai抗性基因的表达代替（priya等人。="">，2013; Smutny等人，2010; Smutny等人，2011; Vitriol等人，2007）。通过选择与内源水平相当的GFP标记蛋白的表达水平，我们最小化了由于克服了直接影响蛋白质动力学的调节机制的瞬时过表达人工产物（Goodson等人，2010）。使用这种方法，使用共聚焦显微镜检查，在对应于ZA的小区域中对连接的E-钙粘蛋白-GFP或GFP-Ect2进行FRAP分析（Priya等人，2013; Ratheesh等人。，2012; Gomez等人，2005; ...
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