| A Behavioral Assay to Examine the Effects of Kavalactones on Caenorhabditis elegans Neuromuscular Excitability
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Author:
Date:
2018-09-20
[Abstract] Kavalactones are a class of lactone compounds found in Kava, a traditional beverage from the South Pacific Islands that is derived from the root of Piper methysticum. When consumed, these compounds produce sedative and anxiolytic effects, suggesting their potent actions on the nervous system. Here, we provide a protocol to examine the effects of kavalactones on C. elegans neuromuscular excitability. Our methodology could provide insight into the neurophysiological actions of kavalactones.
[摘要] Kavalactones是一种在Kava中发现的内酯化合物，Kava是一种来自南太平洋群岛的传统饮料，来自 Piper methysticum 的根。 当食用时，这些化合物会产生镇静和抗焦虑作用，这表明它们对神经系统有很强的作用。 在这里，我们提供了一个协议来检查kavalactones对 C的影响。 线虫神经肌肉兴奋性。 我们的方法可以提供对kavalactones的神经生理学作用的深入了解。
【背景】卡瓦是一种来自太平洋群岛的宁静饮料，几个世纪以来一直被太平洋岛民消费（Rowe et al。，2011; Kautu et al。，2017）。 卡瓦含有一组名为kavalactones的亲脂性化合物，据信这些化合物对饮料的镇静，抗焦虑和其他治疗作用起作用（Rowe et al。，2011; Savage et al 。，2015; Kautu et al。，2017）。 在这里，我们提供了一个协议，使用 C检查kavalactones对神经肌肉活动的影响。 线虫作为模型系统（Kautu et al。，2017）。 在我们的测定中，我们显示给予卡瓦内酯水溶液以剂量响应方式诱导癫痫样惊厥和麻痹。 这些表现暗示了卡瓦内酯对神经肌肉接头的调节作用。 因此，我们的方案可以提供关于kavalactones的神经生理学作用的重要见解。
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| Synthetic Genetic Interaction (CRISPR-SGI) Profiling in Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Genetic interaction screens are a powerful methodology to establish novel roles for genes and elucidate functional connections between genes. Such studies have been performed to great effect in single-cell organisms such as yeast and E. coli (Schuldiner et al., 2005; Butland et al., 2008; Costanzo et al., 2010), but similar large-scale interaction studies using targeted reverse-genetic deletions in multi-cellular organisms have not been feasible. We developed a CRISPR/Cas9-based method for deleting genes in C. elegans and replacing them with a heterologous fluorescent reporter (Norris et al., 2015). Recently we took advantage of that system to perform a large-scale, reverse genetic screen using null alleles in animals for the first ...
[摘要] 遗传交互筛选是一种强有力的方法，可为基因建立新的作用并阐明基因之间的功能联系。这样的研究已经在单细胞生物如酵母和E中发挥了极大的作用。 （Schuldiner等人，2005; Butland等人，2008; Costanzo等人，2010），但是，在多细胞生物中使用靶向反向遗传缺失的类似大规模相互作用研究尚不可行。我们开发了一种基于CRISPR / Cas9的方法来删除 C中的基因。 elegans 并用异源荧光报道基因取代它们（Norris等人，2015）。最近，我们利用该系统首次在动物中使用无效等位基因进行大规模的反向遗传筛选，重点关注RNA结合蛋白基因（Norris等人，2017）。这种类型的方法应该类似地适用于 C中的许多其他基因类。线虫。在这里，我们详细介绍了生成双突变体库和执行中等通量竞争性健身测定来测试导致适应性变化的遗传相互作用的方案。
【背景】使用反向遗传无效等位基因的大规模遗传相互作用筛选在动物中以前不可行。 RNAi已被用于研究C中的遗传相互作用。通过在存在单一突变背景下敲除大量不同基因的表达（Baugh等人，2005; Lehner等人）， ，2006）。然而，这种策略受到RNAi敲低效率的限制，从而使结果的解释变得复杂。我们开发了一种用于高效编辑 C的方法。线虫基因组（Norris et ...
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| Infection of Caenorhabditis elegans with Vesicular Stomatitis Virus via Microinjection
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Over the past 15 years, the free-living nematode, Caenorhabditis elegans has become an important model system for exploring eukaryotic innate immunity to bacterial and fungal pathogens. More recently, infection models using either natural or non-natural nematode viruses have also been established in C. elegans. These models offer new opportunities to use the nematode to understand eukaryotic antiviral defense mechanisms. Here we report protocols for the infection of C. elegans with a non-natural viral pathogen, vesicular stomatitis virus (VSV) through microinjection. We also describe how recombinant VSV strains encoding fluorescent or luciferase reporter genes can be used in conjunction with simple fluorescence-, survival-, and luminescence-based assays to ...
[摘要] 在过去的15年中，线虫自由生活已经成为探索真核细菌和真菌病原体真核免疫的重要模型系统。 最近，使用天然或非天然线虫病毒的感染模型也已经在C中建立。线虫。 这些模型提供了使用线虫了解真核抗病毒防御机制的新机会。 在这里，我们报告感染的协议。 线虫与非天然病毒病原体，水泡性口炎病毒（VSV）通过显微注射。 我们还描述了编码荧光或萤光素酶报告基因的重组VSV毒株如何与简单的基于荧光，存活和发光的分析结合使用来鉴定宿主遗传背景，并对病毒感染有不同的易感性。
【背景】由于它的遗传易用性，体积小，文化价廉，透明的身体，自由生活的线虫秀丽隐杆线虫作为模式生物提供了许多优点。此外，C的易感性。线虫对人类多种细菌和真菌病原体的作用使得这种蠕虫成为研究微生物发病机制的有吸引力的系统（Zhang和Hou，2013; Cohen and Troemel，2015）。最近，发现了正义ssRNA奥赛病毒（OV）作为第一种天然的病毒病原体。线虫已经提示使用OV- C。 elegans 模型来定义线虫抗病毒防御机制（Felix等人，2011; Gammon，2017）。这些研究已经证明了线虫抗病毒RNA干扰途径组分如Dicer相关解旋酶1（DRH-1）在限制病毒复制中的明确作用（Ashe等人，2013）。
为了补充OV模型系统，我们最近报道了新一代病毒的产生。使用反义ssRNA水泡性口炎病毒（VSV）（Gammon等人，2017）的线虫模型。用VSV感染野生型（N2）蠕虫是致命的，虽然抗病毒反应（例如突变体，drh-1突变体）突变体缺陷会更快地感染感染（Gammon ...
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