| Generation of Fusarium graminearum Knockout Mutants by the Split-marker Recombination Approach
|
|
Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Fusarium graminearum is a destructive phytopathogen and shows an impressive metabolic diversity. Gene deletion is an important and useful approach for gene function study. Here we present a protocol for generating gene deletion mutant by applying “split-marker” deletion strategy (Catlett et al., 2003) with PEG-mediated protoplast transformation (Yuan et al., 2008; Martín, 2015).
[摘要] 禾谷镰刀菌是一种破坏性的植物病原体，具有令人印象深刻的代谢多样性。 基因缺失是基因功能研究的重要且有用的方法。 在这里，我们提出了一个协议，通过应用“分裂标记”删除策略（Catlett et al。，2003）与PEG介导的原生质体转化（Yuan 等。，2008;Martín，2015）。
|
|
|
| HCV Reporter System (Viral Infection-Activated Split-Intein-Mediated Reporter System) for Testing Virus Cell-to-cell Transmission ex-vivo
|
|
Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] Hepatitis C virus (HCV) spread involves two distinct entry pathways: cell-free transmission and cell-to-cell transmission. Cell-to-cell transmission is not only an efficient way for viruses to spread but also an effective method for escaping neutralizing antibodies. We adapted the viral infection-activated split-intein-mediated reporter system (VISI) and developed a straightforward model for Live-cell monitoring of HCV cell-to-cell transmission ex-vivo: co-culture of HCV infected donor cells (red signal) with uninfected recipient cells (green signal) and elimination of the cell-free transmission by adding potent neutralizing antibody AR3A in the supernatant. With this model, the efficiency of cell-to-cell transmission can be evaluated by counting the number of foci designated by ...
[摘要] 丙型肝炎病毒（HCV）传播涉及两种不同的进入途径：无细胞传播和细胞间传播。 细胞间传播不仅是病毒传播的有效方式，也是逃避中和抗体的有效方法。 我们采用了病毒感染激活的分裂 - 内含肽介导的报告系统（VISI），并开发了一种直接模型，用于活细胞监测HCV细胞间传递离体：共培养 HCV感染的供体细胞（红色信号）与未感染的受体细胞（绿色信号）和通过在上清液中加入有效的中和抗体AR3A消除无细胞的传递。 利用该模型，可以通过计数受体细胞的绿色信号指定的病灶数来评估细胞间传递的效率。
【背景】越来越多的证据证明病毒可以在受感染的组织中使用不同的传播途径（Sattentau，2008; Zhong et al。，2013）。对于HCV传播，无细胞传播和细胞间传播均可介导肝细胞之间的病毒转移。虽然无细胞传播引发HCV感染，但认为细胞 - 细胞传递直接将HCV转移至相邻的肝细胞。它提供了抵抗中和抗体并有助于病毒持久性的极好方法（Brimacombe et al。，2011; Xiao et al。，2014）。之前的文章也证明了一些促进细胞传递的宿主因子，如清道夫受体BI（SR-BI），CD81，紧密连接蛋白claudin-1（CLDN1），Occludin（OCLN），表皮生长因子受体（EGFR）。 （Witteveldt et al。，2009; ...
|
|
|
| Determination of Intracellular Osmolytes in Cyanobacterial Cells
|
|
Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract] Most of the cyanobacteria accumulate osmolytes including sucrose, glucosylglycerol, in their cells in response to salt stress. Here we describe a protocol of our laboratory for extraction and quantification of cyanobacterial intracellular sucrose and glucosylglycerol. We have confirmed this protocol was applicable to at least four kinds of cyanobacteria, filamentous cyanobacterium Anabaena sp. PCC 7120, unicellular cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803, Synechococcus elongatus PCC 7942 and halotolerant unicellular cyanobacterium Synechococcus sp. PCC 7002.
[摘要] 大多数蓝细菌在其细胞中积累包括蔗糖，葡萄糖基甘油在内的渗透压以响应盐胁迫。 在这里，我们描述了我们实验室的蓝藻细胞内蔗糖和葡萄糖甘油的提取和定量方案。 我们已证实此方案适用于至少四种蓝藻，丝状蓝藻Anabaena sp。 PCC 7120，单细胞蓝藻集胞藻 sp。 PCC 6803，细长聚球蓝细菌PCC 7942和耐盐单细胞蓝细菌聚球蓝细菌。 PCC 7002。【背景】Osmolytes（或相容溶质）是一组低分子量的有机溶质，对包括蓝细菌在内的微生物的非生物胁迫适应具有重要的生理作用（Reed和Stewart，1985;Klähn和Hagemann，2011; Slama等人。，2015）。为了确定来自蓝细菌细胞的细胞内渗透物，已经建立了几种方案（Reed和Stewart，1985; Hagemann等人，1997; Motta等人，2004; Du ，2013; Fa et al。，2015）。在这些方法中，基于核磁共振（NMR）光谱的方法是唯一可以直接应用于微生物培养物而不需要任何提取程序的方法（Motta等人，2004年）。然而，这个方案刚刚在Halomonas pantelleriensis 和Sulfolobus solfataricus ...
|
|
|