| Ex vivo Culture of Adult Mouse Antral Glands
|
|
Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] The tri-dimensional culture, initially described by Sato et al. (2009) in order to isolate and characterize epithelial stem cells of the adult small intestine, has been subsequently adapted to many different organs. One of the first examples was the isolation and culture of antral stem cells by Barker et al. (2010), who efficiently generated organoids that recapitulate the mature pyloric epithelium in vitro. This ex vivo approach is suitable and promising to study gastric function in homeostasis as well as in disease. We have adapted Barker’s protocol to compare homeostatic and regenerating tissues and here, we meticulously describe, step by step, the isolation and culture of antral glands as well as the isolation of single cells from antral glands that ...
[摘要] 为了分离和表征成年小肠的上皮干细胞，最初由Sato等人（2009）描述的三维培养物已经随后适应于许多不同的器官。其中一个例子是Barker等人（2010）分离和培养窦性干细胞，他们有效地产生了在体外重现成熟幽门上皮的组织细胞。这种“离体”方法是适合的，并且有希望研究体内平衡和疾病中的胃功能。我们已经调整了Barker的方案来比较稳态和再生组织，这里，我们一步一步地仔细地描述了窦腺的分离和培养，以及从细胞分选后可能用于培养的窦腺中分离单细胞一个例子（Fernandez Vallone等人，2016）。
背景来自腺体的小鼠成体干细胞可以在3D matrigel中离体生长，作为“迷你腺体”无限期（Barker等人，2010） 。与EGF，Noggin和R-spondin 1存在下生长的小鼠成年小肠的干细胞相比，胃干细胞需要进一步补充Fgf10，胃泌素，Wnt3a和更高浓度的R-螺旋菌素1（称为作为ENRFGW）获得生产性文化。直到最近，在干细胞消融后，在离体培养系统中成体再生窦腺是否生长，如果是这样，仍然是未知的。使用本方案，证明了内源性和再生的腺体在接种时不会类似地生长并且表现出不同的生长培养要求。
|
|
|
| Ex vivo Culture of Fetal Mouse Gastric Epithelial Progenitors
|
|
Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] Isolation and tridimensional culture of murine fetal progenitors from the digestive tract represents a new approach to study the nature and the biological characteristics of these epithelial cells that are present before the onset of the cytodifferentiation process during development. In 2013, Mustata et al. described the isolation of intestinal fetal progenitors growing as spheroids in the ex vivo culture system initially implemented by Sato et al. (2009) to grow adult intestinal stem cells. Noteworthy, fetal-derived spheroids have high self-renewal capacity making easy their indefinite maintenance in culture. Here, we report an adapted protocol for isolation and ex vivo culture and maintenance of fetal epithelial progenitors from distal pre-glandular ...
[摘要] 来自消化道的鼠胎儿祖细胞的分离和三维培养代表了研究在发育过程中细胞分化过程开始前存在的这些上皮细胞的性质和生物学特征的新方法。在2013年，Mustata等人描述了在最初由佐藤等人实施的离体培养系统中分离作为球体生长的肠胎细胞祖细胞。 >（2009）增长成年肠干细胞。值得注意的是，胎儿衍生的球体具有较高的自我更新能力，使其在文化中的无限期维护变得容易。在这里，我们报告了用于分离和远离前胃腺胃生长为胃球体的胎儿上皮祖细胞的分离和离体培养和维持的修改方案（Fernandez Vallone等人， 2016）。
背景 来自腺体的小鼠成体干细胞可以在3D matrigel中离体生长，作为“迷你腺体”无限期（Barker等人，2010） 。与在EGF，Noggin和R-spondin 1存在下生长的小肠的干细胞相比，成年胃干细胞需要进一步补充Fgf10，胃泌素，Wnt3a和更高浓度的R-spondin 1以获得生产性 - 文化。相比之下，到目前为止，很少知道在发育期间排列前腺上皮细胞的胎儿细胞。到目前为止，它们的性质以及其离体的潜在生长特性未明确。基于以前的研究，确定胎儿小肠（Mustata等人，2013年）中存在的细胞，我们报告了作为球体的小鼠胎儿胃祖细胞的培养（Fernandez Vallone et al。 。，2016）。可以在2009年由佐藤等人先前报道的培养基中重复胃祖细胞以生长小肠成体干细胞，与成人型胃干细胞相反，它们不需要额外的生长因子补充（Fgf10，Wnt3a或胃泌素）。 ...
|
|
|
| Electroporation of Embryonic Chick Eyes
|
|
Author:
Date:
2015-06-20
[Abstract] The chick embryo has prevailed as one of the major models to study developmental biology, cell biology and regeneration. From all the anatomical features of the chick embryo, the eye is one of the most studied. In the chick embryo, the eye develops between 26 and 33 h after incubation (Stages 8-9, Hamburger and Hamilton, 1951). It originates from the posterior region of the forebrain, called the diencephalon. However, the vertebrate eye includes tissues from different origins including surface ectoderm (lens and cornea), anterior neural plate (retina, iris, ciliary body and retinal pigmented epithelium) and neural crest/head mesoderm (stroma of the iris and of the ciliary body as well as choroid, sclera and part of the cornea). After gastrulation, a single eye field originates from the ...
[摘要] 鸡胚已成为研究发育生物学，细胞生物学和再生的主要模型之一。从鸡胚的所有解剖特征，眼睛是研究最多的之一。在鸡胚中，眼睛在孵育后26和33小时之间发育（阶段8-9，Hamburger和Hamilton，1951）。它起源于前脑的后部区域，称为间脑。然而，脊椎动物眼睛包括来自不同起源的组织，包括表面外胚层（晶状体和角膜），前神经板（视网膜，虹膜，睫状体和视网膜色素上皮）和神经嵴/头中胚层（虹膜和睫状体的基质以及脉络膜，巩膜和角膜的一部分）。在预处理后，单个眼视野源自前神经板，并且其特征在于协调眼部发育程序的眼场转录因子（EFTF）的表达。在后来的发展中，眼球分成两部分和视囊泡形式。在与透镜阵列几次感应相互作用之后，形成视杯。在阶段14-15，视杯的外层变成视网膜色素上皮（RPE），而内层形成最终分化成视网膜的神经上皮。鸡胚的一个主要优点是进行实验以过表达或下调基因表达在一个地方和时间特异性方式来探索基因功能和调节的可能性。这个协议的目的是描述电穿孔技术在阶段8-12（前神经折叠和光囊泡阶段）和阶段19-26（眼杯，RPE和神经上皮）。我们提供设备，材料和电极设置的完整描述，以及高度可重现的协议的详细描述，包括一些有代表性的结果。该协议已经从我们以前的出版物Luz-Madrigal等人（2014）和Zhu等人（2014）中改编而来。
|
|
|