| Bioorthogonal Labeling and Chemoselective Functionalization of Lung Extracellular Matrix
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Author:
Date:
2021-02-20
[Abstract] Decellularized extracellular matrix (ECM) biomaterials derived from native tissues and organs are widely used for tissue engineering and wound repair. To boost their regenerative potential, ECM biomaterials can be functionalized via the immobilization of bioactive molecules. To enable ECM functionalization in a chemoselective manner, we have recently reported an effective approach for labeling native organ ECM with the click chemistry-reactive azide ligand via physiologic post-translational glycosylation. Here, using the rat lung as a model, we provide a detailed protocol for in vivo and ex vivo metabolic azide labeling of the native organ ECM using N-Azidoacetylgalactosamine-tetraacylated (Ac4GalNAz), together with procedures for decellularization and labeling characterization. Our ...
[摘要] [摘要]源自天然组织和器官的脱细胞细胞外基质（ECM）生物材料被广泛用于组织工程和伤口修复。为了增强其再生潜力，可以通过固定生物活性分子来使ECM生物材料功能化。为了使ECM以化学选择性的方式实现功能化，我们最近报告了一种有效的方法，可通过生理学上的翻译后糖基化，用点击化学反应的叠氮化物配体标记天然器官ECM 。在此，使用大鼠肺为模型，我们提供一种用于详细方案在体内和离体代谢叠氮化物使用N- Azidoacetylgalactosamine-tetraacylated天然器官ECM的标记（AC 4GalNAz），以及用于脱细胞和标记表征的程序。我们的方法可以在体内三天内或离体器官培养期间的一天之内进行特异性而稳定的ECM标记。脱细胞后，所得的ECM标记保持稳定。通过我们的方法，ECM生物材料可以用所需的炔烃修饰的生物分子（例如生长因子和糖胺聚糖）进行功能化，以用于组织工程和再生应用。
关键字：细胞外基质，脱细胞，生物正交，化学选择性功能化，点击化学，肺
[背景]细胞外基质（ECM）是由特定组织或器官的非细胞成分组成的水合网络支架，在通过其所包含的生物活性成分（例如纤维蛋白，生长）支持住宅细胞的活动中起关键作用。因子和糖胺聚糖（GAG）（Theocharis et ...
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| A Rigorous Quantitative Approach to Analyzing Phagocytosis Assays
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Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] Studying monocytic cells in isolated systems in vitro contributes significantly to the understanding of innate immune physiology. Functional assays produce read outs which can be used to measure responses to selected stimuli, such as pathogen exposure, antigen loading, and cytokine stimulation. Integration of these results with high quality in vivo models allows for the development of therapeutics which target these cell populations. Current methodologies to quantify phagocytic function of monocytic cells in vitro either measure phagocytic activity of individual cells (average number of beads or particles/cell), or a population outcome (% cells that contain phagocytosed material). Here we address technical challenges and shortcomings of these methods and present ...
[摘要] [摘要] 研究体外分离系统中的单核细胞有助于理解先天免疫生理学。功能分析产生的读数可用于测量对选定刺激的反应，如病原体暴露、抗原装载和细胞因子刺激。将这些结果与高质量的体内模型相结合，可以开发针对这些细胞群的治疗方法。目前在体外定量单核细胞吞噬功能的方法要么测量单个细胞的吞噬活性（平均小球数或颗粒数/细胞数），要么是群体结果（含有吞噬物质的细胞百分数）。在这里，我们解决了这些方法的技术挑战和缺点，并提出了一个收集和分析数据的协议，从功能分析中测量巨噬细胞和巨噬细胞样细胞的吞噬活性。我们将此方法应用于两种不同的实验条件，并与现有的工作流程进行了比较。我们还提供了一个在线工具，供用户使用这种方法上传和分析数据。
[背景] 单核细胞系细胞（单核细胞、巨噬细胞和小胶质细胞）观察组织是否存在病理威胁，并充当先天免疫系统的中枢。它们以多种方式行使先天免疫功能：分泌细胞因子和趋化因子，通过补体信号通路发挥作用，吞噬病原体和碎片。巨噬细胞的活化程度可以在健康和疾病期间打破体内免疫反应的平衡。在像癌症这样的疾病中，单核细胞的激活可以导致亲肿瘤或抗肿瘤反应，从而引发不同的疾病结果。同样，单核细胞调节自身免疫和炎症性疾病的进展和缓解。因此，对这些细胞及其反应进行表征，以确定可用于治疗的步骤是至关重要的。
在系统中，通过特定的分析来询问这些固有免疫细胞对刺激的反应的功能。吞噬试验是表征单核细胞活化程度的重要工具。存在一些变化，如脉冲追逐试验、粒子加载和/或珠粒加载。在用药物、细胞因子或预处理的细胞培养基刺激单核细胞群后，分析结果报告细胞吸收环境中颗粒的能力增加或减少的程度，从而深入了解这些刺激在健康和疾病期间如何影响单核细胞。 ...
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