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Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract] This protocol describes the technique of ex-vivo electroporation to target embryonic hippocampal progenitors in an organotypic slice preparation. This technique allows gene perturbation for examining developmental processes in the embryonic hippocampus while retaining the environment and connectivity of the cells. Gene perturbation can include Cre-mediated recombination, RNAi-mediated knockdown, gene overexpression, or a combination of any of these. Ex-vivo electroporation can be performed at a wide range of embryonic stages, giving temporal control to the experimenter. Spatial control can be achieved more easily by preparing the brain in a Petri dish to target particular regions of the hippocampus. The electroporated explant cultures provide a highly tractable system ...
[摘要] 该协议描述了在器官切片制备中靶向胚胎海马祖细胞的体外电穿孔技术。 该技术允许基因摄动检查胚胎海马体的发育过程，同时保持细胞的环境和连接性。 基因扰动可以包括Cre介导的重组，RNAi介导的敲低，基因过表达或这些中任何的组合。 可以在广泛的胚胎阶段进行体外电穿孔，为实验者提供时间控制。 空间控制可以通过在皮氏培养皿中准备大脑来瞄准海马的特定区域来实现。 电穿孔的外植体培养物提供了用于研究包括祖细胞增殖，迁移和细胞命运获取在内的发育过程的高度易处理的系统。
【背景】由于其位于尾端的端脑，海马在可达性方面提出了挑战。胚胎海马甚至更难以接近，需要用子宫外科手术方法进行实验操作。器官切片文化规避了这个问题，同时保留了海马场细胞构筑学的许多方面，包括分子特征和连接性。尽管有描述来自啮齿类动物大脑的海马外植体产后培养的规程（Stoppini等人，1991; ...
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Author:
Date:
2015-06-20
[Abstract] The chick embryo has prevailed as one of the major models to study developmental biology, cell biology and regeneration. From all the anatomical features of the chick embryo, the eye is one of the most studied. In the chick embryo, the eye develops between 26 and 33 h after incubation (Stages 8-9, Hamburger and Hamilton, 1951). It originates from the posterior region of the forebrain, called the diencephalon. However, the vertebrate eye includes tissues from different origins including surface ectoderm (lens and cornea), anterior neural plate (retina, iris, ciliary body and retinal pigmented epithelium) and neural crest/head mesoderm (stroma of the iris and of the ciliary body as well as choroid, sclera and part of the cornea). After gastrulation, a single eye field originates from the ...
[摘要] 鸡胚已成为研究发育生物学，细胞生物学和再生的主要模型之一。从鸡胚的所有解剖特征，眼睛是研究最多的之一。在鸡胚中，眼睛在孵育后26和33小时之间发育（阶段8-9，Hamburger和Hamilton，1951）。它起源于前脑的后部区域，称为间脑。然而，脊椎动物眼睛包括来自不同起源的组织，包括表面外胚层（晶状体和角膜），前神经板（视网膜，虹膜，睫状体和视网膜色素上皮）和神经嵴/头中胚层（虹膜和睫状体的基质以及脉络膜，巩膜和角膜的一部分）。在预处理后，单个眼视野源自前神经板，并且其特征在于协调眼部发育程序的眼场转录因子（EFTF）的表达。在后来的发展中，眼球分成两部分和视囊泡形式。在与透镜阵列几次感应相互作用之后，形成视杯。在阶段14-15，视杯的外层变成视网膜色素上皮（RPE），而内层形成最终分化成视网膜的神经上皮。鸡胚的一个主要优点是进行实验以过表达或下调基因表达在一个地方和时间特异性方式来探索基因功能和调节的可能性。这个协议的目的是描述电穿孔技术在阶段8-12（前神经折叠和光囊泡阶段）和阶段19-26（眼杯，RPE和神经上皮）。我们提供设备，材料和电极设置的完整描述，以及高度可重现的协议的详细描述，包括一些有代表性的结果。该协议已经从我们以前的出版物Luz-Madrigal等人（2014）和Zhu等人（2014）中改编而来。
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