| Isolation and Cultivation of Primary Brain Endothelial Cells from Adult Mice
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Brain endothelial cells are the major building block of the blood-brain barrier. To study the role of brain endothelial cells in vitro, the isolation of primary cells is of critical value. Here, we describe a protocol in which vessel fragments are isolated from adult mice. After density centrifugation and mild digestion of the fragments, outgrowing endothelial cells are selected by puromycin treatment and grown to confluence within one week.
[摘要] 脑内皮细胞是血脑屏障的主要组成部分。 为了研究脑内皮细胞在体外的作用，原代细胞的分离是临床价值。 在这里，我们描述了一种方案，其中血管片段与成年小鼠分离。 在密度离心和片段的温和消化后，通过嘌呤霉素处理选择出生长的内皮细胞，并在一周内生长至汇合。
【背景】血脑屏障保护大脑免受细胞和物质的不受控制的侵入。 这主要是由脑内皮细胞形成的屏障组成的紧密和粘附连接限制细胞旁运输。
该方案被开发以克服维持其关键特征的小鼠脑内皮细胞系的有限可用性，例如表达足够量的紧密连接蛋白如闭合蛋白，ZO-1或紧密连接蛋白-5以诱导高跨内皮细胞抗性。
此外，从内含基因修饰的小鼠中分离脑内皮细胞可以在体外研究基因特异性功能。
使用这种方法，我们以前补充了体内研究，证明NF-κB信号在脑内皮细胞中维持正常血脑屏障功能的重要性（Ridder等，2015）。
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| Cytotoxicity Assay for Detection of Cereulide Produced by Emetic Bacillus cereus
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Author:
Date:
2013-01-20
[Abstract] The emetic subgroup of Bacillus cereus strains produces cereulide, a dodecadepsipeptide (1.2 kDa), which is the causative agent of food poisonings. Cereulide is synthesized by a nonribosomal peptide synthetase (NRPS), the Ces-NRPS (Ehling-Schulz et al., 2006). Cereulide is a cyclic and lipophilic potassium ionophor structurally related to the macrolide antibiotic valinomycin. Both substances act on mitochondria by depolarization and uncoupling of ATP synthesis, and this effect (mitochondrial swelling) is used to quantify cereulide in a HEp-2 cell based viability assay.
In this protocol, which was modified from an assay published by Finlay et al. (1999), valinomycin is used as a reference standard for ionophor–induced cytotoxicity, because purified ...
[摘要] 蜡状芽孢杆菌菌株的催吐亚组产生作为食物中毒的致病因子的十二缩酚酸肽（1.2kDa）的cereulide。谷胱甘肽通过非核糖体肽合成酶（NRPS），Ces-NRPS（Ehling-Schulz等人，2006）合成。脑苷脂是与大环内酯类抗生素缬氨霉素结构相关的环状和亲脂性钾离子体。这两种物质通过ATP合成的去极化和解偶联作用于线粒体，并且该效应（线粒体肿胀）用于在基于HEp-2细胞的活力测定中量化脑苷脂。
在该方案中，根据Finlay等人（1999）发表的试验进行了修改，缬氨霉素被用作离子体诱导的细胞毒性的参考标准，因为纯化的脑苷脂不是商业上的可用。该测定法已经用于定量来自不同B的脑梗的量。 cereus突变体（Lücking等人，2009; Frenzel等人，2012），并且估计从人类（人工）污染的食物中提取的脑苷脂水平> B。 cereus （Frenzel ，2011）。
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