Modifying Styrene-maleic Acid Co-polymer for Studying Lipid Nanodiscs by Direct Fluorescent Labeling
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] This protocol was developed to functionalize styrene maleic acid (SMA) by direct fluorescent labeling in an easy way, accessible to biochemistry laboratories. This novel method is based on the coupling of carboxylic acids to primary amines using a carbodiimide, a reaction commonly used for protein chemistry. The procedure uses the hydrolyzed styrene-maleic acid copolymer and occurs entirely in aqueous solution with mild conditions compatible with many biomolecules.
[摘要] 该协议旨在通过直接荧光标记以简单的方式使苯乙烯马来酸(SMA)功能化,生物化学实验室可以使用。 该新方法基于使用碳二亚胺(一种常用于蛋白质化学的反应)将羧酸偶联到伯胺上。 该方法使用水解的苯乙烯 - 马来酸共聚物并且完全在水溶液中发生,具有与许多生物分子相容的温和条件。
【背景】膜蛋白体外的表征可能非常具有挑战性(Grisshammer和Tate,1995)。除了过度表达和膜分离的困难之外,还需要从其天然环境中提取膜蛋白。必需的溶解步骤通常需要使用去污剂来代替天然脂质环境,这通常会导致膜蛋白的结构和/或活性的丧失(Duquesne 等人,2016)。出于这个原因,已经开发了几种替代选择,例如amphipols(Popot,2010),以避免与洗涤剂相关的一些困难并保持膜蛋白的溶解度。几年前,苯乙烯马来酸(SMA)共聚物更常用作低分子量洗涤剂策略的替代品(Dorr et al。,2014; Jamshad et al。 ,2015; Prabudiansyah et al。,2015)。已经证明SMA能够自发地溶解生物膜并产生平均尺寸为10nm的圆盘形颗粒。这些纳米圆盘(称为SMALP)含有嵌入来自膜和SMA共聚物的脂质中的蛋白质混合物,将颗粒保持在溶液中(Knowles 等人,,2009)。 ...
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Boron Uptake Assay in Xenopus laevis Oocytes
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Boron (B) is essential for plant growth and taken up by plant roots as boric acid. Under B limitation, B uptake and translocation in plants are dependent on the boric acid channels located in the plasma membrane. Xenopus leavis oocyte is a reliable heterologous expression system to characterize transport activities of boric acid channels and related major intrinsic proteins (aquaporins). Here, we outline the protocols for expression of boric acid channels and boric acid uptake assay in Xenopus leavis oocytes.
[摘要] 硼(B)对植物生长至关重要,并被植物根部吸收为硼酸。 在B限制下,植物中的B吸收和转运依赖于位于质膜中的硼酸通道。 非洲爪蟾卵母细胞是一种可靠的异源表达系统,用于表征硼酸通道和相关主要内在蛋白(水通道蛋白)的运输活性。 在这里,我们概述了在非洲爪蟾卵母细胞中表达硼酸通道和硼酸摄取测定的方案。
【背景】硼对植物生长是必不可少的,但是它在积累时是有毒的。硼通过鼠李糖聚半乳糖醛酸II区果胶多糖的交联在细胞壁中具有结构功能(Funakawa和Miwa,2015)。在溶液中,B主要以生理pH下的硼酸形式存在[B(OH)3 H 2 O 2 B(OH)4] + - (p k a = 9.24)]。硼酸是一种小的中性分子,因此在生物膜上显示出显着的被动扩散(Dordas等人,2000)。此外,植物利用属于主要内在蛋白质(MIP,水通道蛋白)家族的硼酸通道和硼酸盐出口者(BOR家族)来维持B体内平衡(Takano等人,2008)。
最初,玉米PIP1在非洲爪蟾卵母细胞中表达并且显示出促进硼酸摄入比注水卵母细胞高30%(Dordas et al。 2000>)。然后,显示拟南芥NIP5; 1促进硼酸摄取比注水卵母细胞高5至9倍(Takano等人,2006)。与发现缺乏NIP5; ...
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