| Determination of the Glycolysis and Lipogenesis in Culture of Hepatocytes
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Author:
Date:
2016-11-05
[Abstract] Metabolic flux analyses are needed to provide insights into metabolic regulation that occurs in cells. The current protocol describes fast and reproducible methods for determining glycolysis and de novo lipogenesis of hepatocytes. Primary culture of hepatocytes is an ‘in vitro’ model useful to study liver glucose and lipid metabolism (Denechaud et al., 2016). The protocol is divided in 2 parts. Part I: Glycolysis experiment is assessed using the Seahorse extracellular flux (XF) analyser. Glycolysis is determined via the measurement of the extracellular acidification rate (ECAR) of the media, which come predominately from the cellular excretion of lactic acid after the conversion of glucose in pyruvate. Part II: De novo lipogenesis experiment determines ...
[摘要] 需要代谢通量分析来提供细胞中发生的代谢调节的见解。目前的协议描述了确定糖酵解和肝细胞脂肪生成的快速和可重复的方法。肝细胞的原代培养是用于研究肝葡萄糖和脂质代谢的"体外"模型（Denechaud等人，2016）。协议分为2部分。第I部分：使用海马细胞外通量（XF）分析仪评估糖酵解实验。糖酵解通过测量培养基的细胞外酸化速率（ECAR）来确定，所述培养基主要来自丙酮酸中葡萄糖转化后乳酸的细胞排泄。第II部分：新生脂肪生成实验测定来自乙酸盐C 14+前体的甘油三酯（TG）中的放射性C 14+掺入。在2小时后，向培养基中补加乙酸盐，提取脂质，并在新合成的TG标记的定量之前通过TLC（薄层色谱）分离。
[背景] 有不同的方法来评估葡萄糖和脂质代谢：代谢物定量，酶活性和代谢组学...我们的协议聚焦于活细胞的代谢通量分析并且不需要代谢组学设施。海马细胞外通量（XF）分析仪，现在存在于很多机构，是通过确定培养基pH值间接测量活细胞间接糖酵解的强大工具。脂肪生成协议不需要大投资，是高度可重复的。也可以使用氚化水确定，其通过脂肪酸合酶引入新鲜合成的脂质中。
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| A 3D Culture System of Human Immortalized Myometrial Cells
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Author:
Date:
2016-10-20
[Abstract] Myometrium forms the middle layer of the uterus and is mainly composed of the smooth muscle cells. The cells in vitro are usually grown in a single layer (2-dimensional; 2D) format, whereas in vivo cells are structured in an extracellular matrix scaffolding that allows the cells to communicate and respond to environmental cues. We have developed human myometrium and leiomyoma 3-dimensional (3D) culture, wherein the cells retain their molecular characteristics and respond to environmental cues (Malik and Catherino, 2012; Malik et al., 2014).
[摘要] 子宫肌层形成子宫的中间层，主要由平滑肌细胞组成。细胞在体外通常生长在单层（2维; 2D）格式中，而体内细胞在细胞外基质支架中结构化，其允许细胞沟通和响应环境线索。我们已经开发了人子宫肌瘤和平滑肌瘤3维（3D）培养物，其中细胞保留其分子特征并响应环境线索（Malik和Catherino，2012; Malik等人，2014）。 br /> [背景] 在过去十年中，随着更多实验室从使用人工2D格式的细胞培养转移到3D细胞培养模型系统，观察到一定的转变，其中细胞生长在允许它们附着并获得更生理结构的基质中。该模型系统为细胞提供更自然的分化状态，并且培养的细胞在体内形成组织样环境。这是一个详细的协议为myometrium 3D细胞培养生长胶原-1矩阵，修改从Malik和Catherino（2012年）。
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