| 59Fe Uptake Assays in Paracoccidioides Species
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Author:
Date:
2016-09-20
[Abstract] Iron is an essential micronutrient required for virtually all organisms. This fact is related to the ability of the transition metal to exist in two oxidation states, the reduced ferrous (Fe2+) and the oxidized ferric (Fe3+). Given the relative availability of aqueous iron (the element which constitutes ~5% of the earth’s crust) one is not surprised that iron is the most common prosthetic element in biology. Usually, fungi can uptake iron through receptor-mediated internalization of a siderophore or heme, and/or reductive iron assimilation (RIA) (Kosman, 2013). In this way, the uptake of iron in the absence or presence of the reducing agent ascorbic acid can be investigated by 59Fe uptake assays, as previously described (Eide et al., 1992). In the ...
[摘要] 铁是几乎所有生物体所必需的微量营养素。这一事实涉及过渡金属以两种氧化态存在的能力，即还原的亚铁（Fe 2+）和氧化的铁（Fe 3++）。考虑到铁水（构成地壳的〜5％的元素）的相对可用性，人们不惊讶的是，铁是生物学中最常见的假体元素。通常，真菌可以通过受体介导的铁载体或血红素的内化，和/或还原铁同化（RIA）吸收铁（Kosman，2013）。以这种方式，如上所述，可以通过59 Fe吸收测定来研究在还原剂抗坏血酸存在或不存在下铁的吸收（Eide等人）。 ，1992）。在抗坏血酸存在下，研究还原非依赖性59 Fe吸收途径。另一方面，在不存在抗坏血酸的情况下，刺激还原依赖性59 Fe吸收途径。使用这种策略用于人类致病真菌Paracoccidioides物种，结果表明，在没有抗坏血酸的情况下，通过 01的铁摄取是低的，不同于在 > Pb 18。这些结果表明，只有在Fe 18中，铁摄取路径与铁还原酶偶联（Bailão等人，2015）。在该方案中，我们描述了如何在Paracoccidioides物种中进行 59 Fe摄取测定。
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| Generation of IgG-Fc Glycovariants Using Recombinant Glycosidases and Glycosyltransferases
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Author:
Date:
2016-08-05
[Abstract] The immunoglobulin G (IgG) fragment crystallizable (Fc) domain contains a single, highly conserved asparagine 297 (N297) glycosylation site in the CH2 domain, which is buried within the hydrophobic core of each of the two heavy chains. The biantennary core glycan structure, composed of 2 N-acetylglucosamine (GlcNAc) and 3 mannose residues, can be further decorated with fucose, bisecting GlcNAc and terminal GlcNAc, galactose, and sialic acid. Presence or absence of distinct residues can alter IgG effector functions such as antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) or complement-dependent cytotoxicity (CDC). Here, we provide a protocol for the generation of IgG-Fc de-galactosylated, galactosylated, de-sialylated and sialylated IgG antibodies using recombinant glycosidases and ...
[摘要] 免疫球蛋白G（IgG）片段可结晶（Fc）结构域在CH2结构域中包含单个，高度保守的天冬酰胺297（N297）糖基化位点，其掩埋在两条重链的每一条的疏水核内。由2个N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和3个甘露糖残基组成的双触角核心聚糖结构可以进一步用岩藻糖，二等分GlcNAc和末端GlcNAc，半乳糖和唾液酸装饰。不同残基的存在或不存在可以改变IgG效应子功能，例如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC）或补体依赖性细胞毒性（CDC）。在这里，我们提供使用重组糖苷酶和糖基转移酶产生IgG-Fc去半乳糖基化，半乳糖基化，去唾液酸化和唾液酸化IgG抗体的方案。
[背景] 糖基转移酶用于抗体聚糖修饰的用途允许将糖底物连接到预先存在的聚糖残基上。免疫球蛋白G在其每个CH2结构域中携带单个高度保守的N-糖基化位点（Arnold等人，2007）（图1），允许用糖基转移酶进行位点特异性聚糖修饰。如果抗体的Fab结构域含有Asn-X-Ser/Thr（X≠Pro）序列（Mellquist等人，1998），则抗体可携带额外的N-聚糖。因此，仔细选择缺少Fab糖基化的单克隆抗体对于Fc特异性聚糖修饰是重要的。本文所述的方案是基于以下出版物开发的（Kingston，2003; Kaneko等人，2006; Anthony等人，2008; Barb等人。，2009; Quast ...
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