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Date:
2018-07-20
[Abstract] This protocol describes the rapid and safe production of lentiviral pseudotypes characterized by a lentiviral core containing a reporter, in conjunction with avian influenza haemagglutinin (HA) and human neuraminidase (NA) glycoproteins on the surface. Production is optimized with Endofectin LentiTM transfection reagent in 6-well plate format. These pseudotyped viruses can be employed for serological assays of surface glycoproteins HA and NA. They can be efficiently used to perform the ELLA (Enzyme-linked lectin assay) to measure NA inhibiting antibodies in lieu of using reassortant virus or Triton X-100 inactivated wild-type virus as source of antigen, which may require higher biosafety levels.
[摘要] 该方案描述了慢病毒假型的快速和安全生产，其特征在于含有报道分子的慢病毒核心，以及表面上的禽流感血凝素（HA）和人神经氨酸酶（NA）糖蛋白。 使用6孔板形式的Endofectin Lenti TM 转染试剂优化生产。 这些假型病毒可用于表面糖蛋白HA和NA的血清学测定。 它们可以有效地用于进行ELLA（酶联凝集素测定）以测量NA抑制抗体，而不是使用重配病毒或Triton X-100灭活的野生型病毒作为抗原来源，这可能需要更高的生物安全水平。
【背景】流感病毒假型的产生先前已被广泛描述（Nefkens et al。，2007; Temperton et al。，2007; Carnell et al。，2015）。需要一种安全快速的系统来评估通过ELLA测定靶向NA的抗体，避免使用重配错配病毒或野生型病毒，这已经通过产生携带NA型流感假型来满足（Prevato et al。，2015）。最近的一项研究（Biuso et al。，2017）证实HA与NA的共表达改善了新形成的假型慢病毒的释放。在这里，我们报告了一种简单，广泛适用和优化的PV生产方案，使用6孔板格式的Endofectin Lenti TM ...
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