| Determination of Polyhydroxybutyrate (PHB) Content in Ralstonia eutropha Using Gas Chromatography and Nile Red Staining
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Ralstonia eutropha H16 produces and mobilizes (re-utilizes) intracellular polyhydroxybutyrate (PHB) granules during growth. This protocol describes the visualization of intracellular Nile red stained PHB granules and the quantification of PHB by gas chromatography. Our first method describes how to analyze PHB granules by fluorescence microscopy qualitatively. Our second approach enables the conversion of PHB to volatile hydroxycarboxylic acid methyl esters by acidic methanolysis and their quantification by gas chromatography. Through this method, it is possible to obtain an absolute quantification of PHB, e.g., per cell dry weight.
[摘要] 在生长过程中，富养罗尔斯通氏菌H16产生和动员（重新利用）细胞内聚羟基丁酸酯（PHB）颗粒。 该协议描述了细胞内尼罗红染色的PHB颗粒的可视化和通过气相色谱定量PHB。 我们的第一种方法描述了如何通过荧光显微镜定性分析PHB颗粒。 我们的第二种方法可以通过酸性甲醇分解和气相色谱定量法将PHB转化为挥发性羟基羧酸甲酯。 通过该方法，可以获得PHB的绝对定量，例如，每细胞干重。
【背景】聚羟基脂肪酸酯（PHA），尤其是聚羟基丁酸酯（PHB），是许多原核生物物种中的能量和碳储存化合物，确保细菌在压力条件下存活（Anderson和Dawes，1990;Pötter和Steinbüchel，2006; Jendrossek和Pfeiffer，2014; Bresan， >等。，2016）。这些生物聚合物的工业应用是生物降解塑料的生产（Chen，2009; Riedel等人，2015）和潜在药物成分的研究（Wu，2009; Zonari等人， ，2015; Pacheco et al。，2015; Giretova ...
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| Quantification of Bacterial Polyhydroxybutyrate Content by Flow Cytometry
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] We describe here a detailed protocol for the quantification of the intracellular content of polyhydroxybutyrate (PHB) in a population of bacterial cells by flow cytometry, which is based on a consensus of several previously reported works.
[摘要] 我们在这里描述了通过流式细胞术定量细菌细胞群中的聚羟基丁酸酯（PHB）的细胞内含量的详细方案，其基于几个先前报道的作品的共识。
【背景】在营养物质耗尽和存在可利用的碳源的情况下，可以使用几种细菌（例如，Cupriavidus necator，中华根瘤菌Sinorhizobium meliloti， >假单胞菌（Pseudomonas）开启了聚羟基丁酸酯（PHB）中性聚合物的积累，用于储存碳和还原能力（Jendrossek和Pfeiffer，2014）。定量细菌PHB含量的经典方法基于其初始解聚，随后通过紫外分光光度法或气相色谱定量检测β-羟基丁酸的特定化学衍生物（Law and Slepecky，1961; Braunegg等人， 1978）。最近，荧光染料尼罗红（9-二乙氨基-5H-苯并[α]吩恶嗪-5-酮）（Greenspan和Fowler，1985）将PHB颗粒染色（Müller等人，1993）导致了开发新的快速荧光方法来定量细菌样品中聚合物的含量。随后，将基于尼罗红的PHB染色与流式细胞术偶联使得可以定量细菌群体内单细胞水平的聚合物含量（Gorenflo等人，1999; Kacmar等人2006; Tyo等人，2006; Alves等人，2017; Lagares Jr.等人，， ...
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