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Date:
2016-08-05
[Abstract] Capillary electrophoresis (CE) is identified as a promising technology for the study of nucleic acid molecules because of its high efficiency, high throughput with automation and integration. Compared to the traditional method of slab gel electrophoresis (SGE), the advantages of CE cannot be emphasized more. Most of CE process, including sample injection, detection and data analysis, is able to be automated which will save great labor for industrial and research labs. CE used the separation channel with micrometer-scale diameter, so the joule heat is easy to be dissipated during electrophoresis. Thus high separation voltage (> 100 V/cm) is allowed in CE while in SGE (usually ~10 V/cm) it usually causes severe band broadening. Because the band broadening is restrained efficiently in CE, ...
[摘要] 毛细管电泳（CE）被认为是研究核酸分子的有前景的技术，因为它具有高效率，具有自动化和整合的高通量。与传统的平板凝胶电泳（SGE）方法相比，CE的优点不再强调。大多数CE过程，包括样品注入，检测和数据分析，能够自动化，这将为工业和研究实验室节省大量的劳动力。 CE使用具有微米尺度直径的分离通道，因此在电泳期间焦耳热容易被消散。因此，在CE中允许高分离电压（> 100V/cm），而在SGE（通常〜10V/cm）下，其通常引起严重的带拓宽。因为在CE中能够有效地抑制谱带展宽，所以它能够检测微小的样品并且比SGE更敏感。允许高电压的优点因此加速了CE分离并且与SGE相比产生更好的通量。 CE成本较低的试剂，例如缓冲溶液，筛分基质，染料试剂等。此外，微米级通道容易与上游和下游样品处理单元集成，在芯片上形成实验室。 CE的这个优点已经吸引了来自各个领域的研究人员的相当大的兴趣。
CE的困难涉及将凝胶（琼脂糖或交联聚丙烯酰胺）填充到毛细管中。此外，凝胶毛细管的再现性和寿命受到限制。但是小直径毛细管允许使用可更换的聚合物溶液，其可以有效地防止分离缓冲液的对流。聚合物溶液更容易填充到毛细管中并产生更稳定的分离。因此，通过进行毛细管聚合物电泳（CPE）解决了这些困难，这将在本协议中描述。
已经开发了几种分离模式，例如毛细管凝胶电泳（CGE），CPE，毛细管区带电泳（CZE），毛细管等速电泳（CITP）等，用于分析不同种类的分子。在这里，我们详细介绍了CPE的协议，这是用于分离dsDNA，dsRNA（包括siRNA）分子。将聚合物溶液填充到毛细管中作为用于双链核酸分离的筛分基质。在这种情况下使用羟乙基纤维素（HEC）聚合物作为筛分聚合物。详细描述了自制CE系统。
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