| Human Endothelial Cell Spheroid-based Sprouting Angiogenesis Assay in Collagen
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Angiogenesis, the formation of new blood vessels from pre-existing ones plays an important role during organ development, regeneration and tumor progression. The spheroid-based sprouting assay is a well-established and robust method to study the influence of genetic alterations or pharmacological compounds on capillary-like tube formation of primary cultured endothelial cells. A major advantage of this assay is the possibility to study angiogenesis in a 3D environment. Endothelial cells are cultured as hanging drops to form spheroids. Those spheroids are embedded into a collagen matrix and tube formation is analyzed 24 h later. By analyzing sprout number and sprout length the effects of genetic manipulation or drug treatment on angiogenesis can be investigated.
[摘要] 血管生成，从先前存在的血管形成新血管在器官发育，再生和肿瘤进展中起重要作用。 基于球体的发芽测定法是一种成熟且稳健的方法，用于研究遗传改变或药理学化合物对原代培养的内皮细胞的毛细血管样管形成的影响。 该测定的主要优点是可以在3D环境中研究血管生成。 将内皮细胞培养为悬滴以形成球状体。 将这些球状体嵌入胶原基质中，24小时后分析管形成。 通过分析发芽数和发芽长度，可以研究遗传操作或药物治疗对血管生成的影响。
【背景】血管为器官提供氧气和营养。在不再满足局部需求的情况下，细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）以诱导新血管的形成。新的容器芽由一个由茎细胞牵引的前端细胞组成（Potente和Makinen，2017）。血管生成在生理条件下（例如，肌肉和脂肪组织的生长）以及病理条件（例如，伤口愈合，黄斑变性和肿瘤生长）发生。因此，非常需要破译协调血管生成的基本机制并测试干扰病理性血管生成的化合物。
基于球体的发芽试验由Thomas Korff博士和Hellmut Augustin博士在90年代后期开发（Korff和Augustin，1999），使研究人员能够快速研究药物或基因操作对发芽血管生成的影响。稳健的方式（Heiss et al。，2015）。基于球体的发芽测定的一个重要优点是分析3D环境中的芽形成。这促进内皮细胞之间的细胞 - ...
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| Myeloid Progenitor Transformation Assay
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Numerous oncogenes have been identified to cause leukemia. For example, chromosomal translocation generates various fusion genes of the mixed-lineage leukemia (MLL) gene and a partner gene in leukemia, whose gene products transform primary myeloid progenitors into an immortalized state. To characterize the transforming ability of leukemic oncogenes, researchers in the field have developed an ex vivo murine myeloid transformation assay using retroviral gene transduction and its protocol has been improved over the past 10 years. Here, we provide the detailed procedure for this assay.
[摘要] 许多致癌基因已被确定为导致白血病。 例如，染色体易位在白血病中产生混合谱系白血病（MLL ）基因和伴侣基因的各种融合基因，其基因产物将原始骨髓祖细胞转化为永生状态。 为了表征白血病癌基因的转化能力，本领域的研究人员已经利用逆转录病毒基因转导开发了一种离体小鼠骨髓转化试验，其方案在过去的10年中得到了改进。 在这里，我们提供了这个检测的详细程序。
【背景】染色体易位产生多种导致白血病的MLL融合基因（Meyer等人，2017）。野生型混合谱系白血病（MLL）蛋白质起着转录调节剂的作用，其在造血不成熟祖细胞中增强包括同源框（homoxox（Hox））基因在内的一组基因的表达（Jude等。，2007）。在正常造血期间，Hox基因在干/祖细胞部分中表达，但在分化过程中转录下调（Somervaille和Cleary，2006; Yokoyama等人， 2013年）;然而，MLL融合蛋白组成性地上调其靶基因并阻断分化以在离体培养条件下建立永生状态。最近，我们报道了MLL-ENL和MLL-AF10融合蛋白招募AF4以激活转录并且还募集DOT1L复合物以维持相同靶基因的转录以有效地转化造血祖细胞（Okuda等人， ...
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| In vivo Leukemogenesis Model Using Retrovirus Transduction
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Various genetic alterations such as chromosomal translocation cause leukemia. For examples, gene rearrangements of the mixed-lineage leukemia (MLL) gene generate MLL fusion genes, whose products are potent oncogenic drivers in acute leukemia. To better understand the mechanism of disease onset, several murine leukemia models using retroviral gene transduction, xenograft, or Cre-mediated chromosomal translocation have been developed over the past twenty years. Particularly, a retroviral gene transduction-mediated murine leukemia model has been frequently used in the leukemia research field. Here, we describe the detailed protocol for this model.
[摘要] 各种基因改变如染色体易位导致白血病。 例如，混合谱系白血病（MLL ）基因的基因重排产生MLL 融合基因，其产物是急性白血病中有效的致癌驱动因子。 为了更好地理解疾病发生的机制，过去二十年来已经开发了几种使用逆转录病毒基因转导，异种移植或Cre介导的染色体易位的鼠白血病模型。 特别地，逆转录病毒基因转导介导的鼠白血病模型已经在白血病研究领域中经常使用。 在这里，我们描述这个模型的详细协议。
【背景】基因重排产生混合谱系白血病（MLL ）融合基因，导致高度侵袭性的急性白血病。 MLL重排往往伴随着少量额外的遗传改变和不良的临床结果（Andersson等人，2015）。野生型MLL增强和维持包括同源框（Hox）基因在内的一部分基因的表达，以刺激未成熟祖细胞的扩增（Jude等人，2007年）。在未成熟的祖细胞/干细胞组分中，Hoxa9和emis1的表达最高，但随着细胞分化逐渐下降，并最终在终末分化的细胞组分中减少（Somervaille和Cleary，2006; Yokoyama et al。 ，2013）。 MLL融合蛋白组成性地上调包括Hoxa9和Meis1在内的靶基因的表达，使未成熟的祖细胞永生化，并在体内引起白血病 （Ayton和Cleary，2003; ...
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