| Host-regulated Hepatitis B Virus Capsid Assembly in a Mammalian Cell-free System
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Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract] The hepatitis B virus (HBV) is an important global human pathogen and represents a major cause of hepatitis, liver cirrhosis and liver cancer. The HBV capsid is composed of multiple copies of a single viral protein, the capsid or core protein (HBc), plays multiple roles in the viral life cycle, and has emerged recently as a major target for developing antiviral therapies against HBV infection. Although several systems have been developed to study HBV capsid assembly, including heterologous overexpression systems like bacteria and insect cells, in vitro assembly using purified protein, and mammalian cell culture systems, the requirement for non-physiological concentrations of HBc and salts and the difficulty in manipulating host regulators of assembly presents major limitations ...
[摘要] 乙型肝炎病毒（HBV）是一种重要的全球人类病原体，并且是肝炎，肝硬化和肝癌的主要原因。 HBV衣壳由单个病毒蛋白的多个拷贝组成，衣壳或核心蛋白（HBc）在病毒生命周期中起着多重作用，并且最近已经成为开发抗HBV病毒疗法的主要靶标。尽管已经开发了几种用于研究HBV衣壳组装的系统，包括异源过表达系统如细菌和昆虫细胞，使用纯化蛋白质和哺乳动物细胞培养系统进行体外组装，但对非生理浓度HBc和盐以及难以操纵装配的宿主调节物在生理相关条件下的衣壳装配的详细研究方面存在主要限制。我们最近开发了基于兔网织红细胞裂解物（RRL）的哺乳动物无细胞系统，其中HBc以生理浓度表达并在近生理条件下组装成衣壳。该系统已经揭示了HBc装配要求，这是以前装配系统所不能预料的。此外，该系统中的衣壳组装受可容易操作的内源宿主因子调控。在这里，我们提供了这种无细胞衣壳装配系统的详细协议，包括如何操纵调节装配的宿主因子的说明。
【背景】乙型肝炎病毒（HBV）是一种重要的全球人类病原体，其长期感染全世界数以亿计的人并且代表病毒性肝炎，肝硬化和肝癌的主要原因（Seeger等人， 2013; Trepo et。，2014）。 HBV通过逆转录RNA中间体（所谓的前基因组RNA（pgRNA））在核衣壳内（NC）复制其基因组DNA（一种宽松的环状部分双链DNA（RC ...
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| Establishment of a Human Cell Line Persistently Infected with Sendai Virus
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] Interferon regulatory transcription factor 3 (IRF3) is a transcription factor that upon activation by virus infection promotes the synthesis of antiviral genes, such as the interferons (Hiscott, 2007). In addition to inducing genes, IRF3 triggers antiviral apoptosis by RIG-I-like receptor-induced IRF3 mediated pathway of apoptosis (RIPA), which is independent of its transcriptional activity. RIPA protects against lethal virus infection in cells and mice (Chattopadhyay et al., 2016). In the absence of RIPA, caused by genetic ablation, chemical mutagenesis or inhibition of the pattern recognition receptor (PRR) retinoic acid-inducible gene I (RIG-I), Sendai virus (SeV) infection does not trigger cellular apoptosis and become persistently infected (Peters et al., 2008; ...
[摘要] 干扰素调节转录因子3（IRF3）是一种通过病毒感染活化促进抗病毒基因如干扰素合成的转录因子（Hiscott，2007）。除了诱导基因外，IRF3通过RIG-I样受体诱导的IRF3介导的凋亡途径（RIPA）引发抗病毒凋亡，其与其转录活性无关。 RIPA可防止细胞和小鼠的致死病毒感染（Chattopadhyay et al。，2016）。在不存在RIPA的情况下，遗传消融引起的化学诱变或模式识别受体（PRR）视黄酸诱导型基因I（RIG-1）的抑制，仙台病毒（SeV）感染不会引发细胞凋亡并持续感染（Peters等人，2008; Chattopadhyay等人，2013）。表达IRF3的野生型（WT）细胞（U4C）经历SeV诱导的凋亡;然而，缺乏IRF3表达的P2.1细胞不能引发病毒凋亡（图1）。人类IRF3的异位表达恢复了P2.1细胞的凋亡活性（P2.1 / IRF3，图1）。 SeV用作研究致病性人类病毒的模型，难以与BSL3设施配合使用。我们以前曾报道，人和小鼠细胞都可以在没有IRF3的凋亡活性的情况下建立SeV持久性（Chattopadhyay et al。，2013）。在这里，我们概述了持续的SeV感染的人类细胞系（图2）的开发的详细程序，其连续表达病毒蛋白并产生低水平的感染性病毒颗粒。
【背景】IRF3对于通过促进抗病毒基因的转录来启动宿主细胞中的抗病毒防御机制至关重要（Hiscott，2007; ...
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| RNA Strand Displacement Assay for Hepatitis E Virus Helicase
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] The hepatitis E virus (HEV) helicase uses ATP to unwind the RNA duplexes. This is an essential step for viral replication. This protocol aims to measure the double strand RNA unwinding activity of the HEV helicase.
[摘要] 乙型肝炎病毒（HEV）解旋酶使用ATP来解开RNA双链体。 这是病毒复制的重要步骤。 该方案旨在测量HEV解旋酶的双链RNA展开活性。
已经使用放射性标记的双链RNA（dsRNA，Karpe等人，2010）测量了HEV解旋酶的RNA展开活性。 我们已经建立了用于测量HEV解旋酶的dsRNA展开活性的非放射性测定方案。 该测定利用荧光标记的RNA来测量从人肝癌细胞纯化的HEV解旋酶蛋白的活性，从而消除了处理放射性物质的需要。
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