| Transient Expression Assay in NahG Arabidopsis Plants Using Agrobacterium tumefaciens
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Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract] Agrobacterium-mediated transient expression has greatly contributed to research in molecular plant biology but has low efficiency and inconsistency in Arabidopsis thaliana (Arabidopsis). Here, we describe a simple, efficient and fast protocol to make transient gene expression in NahG Arabidopsis plants using Agrobacterium tumefaciens. This protocol has been successfully used to assess protein sub-cellular localization and accumulation, enzyme activity, and protein-protein interaction. In addition, this assay overcomes the use of Nicotiana benthamiana plants as a surrogate system for transient gene expression assays. Finally, the use of this protocol does not require complex inoculation methods or specific growth conditions, and can be ...
[摘要] 农杆菌介导的瞬时表达大大促进了分子植物生物学的研究，但是在拟南芥（Arabidopsis thaliana）（ Arabidopsis ）中效率低且不一致。 在这里，我们描述了一种简单，高效和快速的方法，用于根据根癌农杆菌在 NahG 拟南芥植物中进行瞬时基因表达。 该方案已成功用于评估蛋白质亚细胞定位和积累，酶活性和蛋白质 - 蛋白质相互作用。 此外，该测定法克服了使用本氏烟草植物作为瞬时基因表达测定的替代系统。 最后，该方案的使用不需要复杂的接种方法或特定的生长条件，并且可以与具有相似结果的不同农杆菌菌株一起使用。
【背景】根癌土壤杆菌（以下简称土壤杆菌）介导的瞬时转化试验已经对分子植物生物学研究作出了重大贡献。这些方法与费时费力的稳定转化方法相比具有许多优点，其中包括在烟草本氏烟中进行瞬时转化测定时更高的效率，简单性和快速，一致的结果。另一方面，当在模式植物拟南芥（以下称为拟南芥）中进行这些测定时，这些测定是无效的并且缺乏稳健性，从而迫使拟南芥研究人员使用 N。本氏烟草作为一种异源系统，这会带来明显的局限性，并可能产生令人误解的结果。
过去已做出许多努力来提高土壤杆菌介导的拟南芥中的瞬时转化的功效（在Krenek等人的综述中，2015年）。 ...
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| In vivo Analysis of Cyclic di-GMP Cyclase and Phosphodiesterase Activity in Escherichia coli Using a Vc2 Riboswitch-based Assay
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Cyclic di-guanosine monophosphate (c-di-GMP) is a ubiquitous second messenger that regulates distinct aspects of bacterial physiology. It is synthesized by diguanylate cyclases (DGCs) and hydrolyzed by phosphodiesterases (PDEs). To date, the activities of DGC and PDE are commonly assessed by phenotypic assays, mass spectrometry analysis of intracellular c-di-GMP concentration, or riboswitch-based fluorescent biosensors. However, some of these methods require cutting-edge equipment, which might not be available in every laboratory. Here, we report a new simple, convenient and cost-effective system to assess the function of DGCs and PDEs in E. coli. This system utilizes the high specificity of a riboswitch to c-di-GMP and its ability to regulate the expression of a downstream ...
[摘要] 环状二磷酸鸟苷（c-di-GMP）是一种无处不在的第二信使，它调节细菌生理学的不同方面。 它由diguanylate环化酶（DGC）合成并被磷酸二酯酶（PDE）水解。 迄今为止，通常通过表型分析，细胞内c-di-GMP浓度的质谱分析或基于核糖开关的荧光生物传感器来评估DGC和PDE的活性。 但是，其中一些方法需要尖端设备，而这些设备可能不适用于每个实验室。 在这里，我们报告了一个新的简单，方便和具有成本效益的系统，用于评估E中DGC和PDE的功能。大肠杆菌。 该系统利用核糖开关对c-di-GMP的高特异性及其响应于c-di-GMP浓度而调节下游β-半乳糖苷酶报道基因的表达的能力。 在该协议中，我们描述了该系统的构建及其用于评估DGC和PDE酶的活性。
【背景】Cyclic-di-GMP是细菌中重要且无处不在的第二信使，其调节各种过程，例如运动到衰退转变，生物膜形成，毒力和细胞周期进展（Römling等人， ，2013）。 GG（D / ...
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