| Artificial Inoculation of Epichloë festucae into Lolium perenne, and Visualisation of Endophytic and Epiphyllous Fungal Growth
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Natural hosts for the fungal endophyte Epichloë festucae include Festuca rubra (fine fescue) and Festuca trachyphylla (hard fescue). Some strains also form stable associations with Lolium perenne (perennial ryegrass). L. perenne is a suitable host to study fungal endophyte–grass interactions, such as endophytic fungal growth within the plant and epiphyllous growth on the plant surface. Here we provide a detailed protocol based on work by, for artificial inoculation of E. festucae into L. perenne, and newly developed staining and visualization techniques for observing endophytic and epiphyllous hyphae and the expressorium, an appressorium-like structure used by the fungus to exit the plant. The staining method uses a combination of ...
[摘要] 真菌内生菌Epichloëfestucae的天然宿主包括 Festuca rubra （细羊茅）和 Festuca trachyphylla （硬羊茅）。一些菌株也与黑麦草（多年生黑麦草）形成稳定的关联。 升。 perenne 是研究真菌内生菌 - 草相互作用的合适宿主，例如植物内生真菌生长和植物表面的叶生生长。在这里，我们提供了一个基于工作的详细协议，用于 E的人工接种。 festucae 进入 L. perenne ，以及新开发的染色和可视化技术，用于观察内生和附生的菌丝和表达菌，这是一种类似真菌的结构，用于离开植物。染色方法使用葡聚糖结合苯胺蓝二铵盐（AB）和几丁质结合小麦胚凝集素缀合的Alexa Fluor ® 488-（WGA-AF488）的组合。该协议将是研究Epichloë -grass相互作用的有用工具，特别是不同Epichloë - 草关联，各种内生菌 - 宿主发育阶段的比较，以及分析突变Epichloë菌株。
【背景】Latch和Christensen（1985）开发了一种用Epichloë内生菌人工感染草的方案。这项工作一直是广泛的 E的基础。 festucae Fl1- L. perenne 共生研究（Scott et al。，2012年综述）。在我们最近的工作中，我们描述了一种新发现的真菌结构，即能够实现 E的表达式。 ...
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| Lung Section Staining and Microscopy
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Our protocol describes immunofluorescent staining, hematoxylin and eosin staining and Masson’s trichrome staining on lung sections.
[摘要] 我们的方案描述了免疫荧光染色，苏木精和伊红染色以及Masson在肺切片上的三色染色。
背景 肺的主要功能是气体交换。肺由各种专门的细胞和组织组成，包括支气管，细支气管和肺泡，以促进气体交换。为了研究小鼠模型中的肺发育或肺部疾病，可以从小鼠中去除肺，并将其冷冻并嵌入最佳切割温度（OCT）化合物或化学保藏并包埋在石蜡中。为了保持肺组织结构，我们用1ml OCT化合物填充肺，用于制备冷冻切片，或用于石蜡切片的10％缓冲福尔马林（Zhou等人，2016）。然后将肺切片从冷冻或石蜡包埋的肺切片并安装到载玻片上用于制备染色。我们使用冷冻组织切片进行基于抗体的免疫荧光染色，并使用石蜡包埋切片进行苏木精和伊红（H＆E）染色或Masson三色染色。冷冻切片更快地准备免疫荧光染色，大多数抗体在冷冻切片上工作良好。石蜡切片也可用于免疫荧光染色，但需要脱蜡，补液和抗原检索。即使在抗原检索后，一些抗体在石蜡切片上也不能很好地工作。然而，石蜡样品可以在室温下储存很长时间，并且可以容易地切成非常薄的部分。石蜡切片保留比冷冻切片更好的组织形态，因此它们对于H＆E或三色染色更好。
＆NBSP;免疫荧光染色是一种使用荧光团观察特异性结合其靶蛋白的抗体位置的免疫组织化学。 ...
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| Aniline Blue and Calcofluor White Staining of Callose and Cellulose in the Streptophyte Green Algae Zygnema and Klebsormidium
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Date:
2016-10-20
[Abstract] Plant including green algal cells are surrounded by a cell wall, which is a diverse composite of complex polysaccharides and crucial for their function and survival. Here we describe two simple protocols to visualize callose (1→3-β-D-glucose) and cellulose (1→4-β-D-glucose) and related polysaccharides in the cell walls of streptophyte green algae. Untreated or algal cells heated in NaOH are incubated in Calcofluor white (binding to β-glucans including cellulose) or Aniline blue (binding to callose), respectively. Both dyes can be visualized by epifluorescence microscopy.
[摘要] 包括绿藻细胞的植物被细胞壁包围，所述细胞壁是复合多糖的多样复合物，并且对于它们的功能和存活是至关重要的。在这里我们描述两个简单的协议，可视化胼lose质（1→3-β-D-葡萄糖）和纤维素（1→4-β-D-葡萄糖）和相关的多糖在链霉素绿藻的细胞壁。将在NaOH中加热的未处理或藻类细胞分别在Calcofluor白（结合β-葡聚糖包括纤维素）或苯胺蓝（结合胼cal质）中孵育。两种染料都可以通过落射荧光显微镜观察。
[背景] 由于其容易和快速的适用性，使用苯胺蓝显现各种株Klebsormidium sp中的胼。质。和在更艰苦的固定和免疫定位方案（Herburger和Holzinger，2015）之前使用Zygnema。应用苯胺蓝染色和单克隆抗体对胼lose质产生类似的结果（Herburger和Holzinger，2015）。 Calcofluor白色染色是观察包括细胞壁的纤维素的1→4-β-葡聚糖部分的最快方式，因为不需要预处理。
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