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Heat Inactivated FBS

Company: Sigma-Aldrich
Catalog#: 16140071
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Ectopic Gene Expression in Macrophages Using in vitro Transcribed mRNA
Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract]  Macrophages are immune cells that contribute to host defense through various mechanisms including phagocytosis and antigen presentation. Their antimicrobial capacity is subverted by clinically important intracellular pathogens such as Mycobacterium tuberculosis. The study of host-pathogen interactions using these cells is therefore of considerable interest. Such studies often seek to express tagged proteins to characterize their activities, localizations, and protein-protein interactions. Here, we describe a robust method for transient protein expression in macrophages using mRNA lipoplex transfections. [摘要]  巨噬细胞是通过包括吞噬作用和抗原呈递在内的多种机制促成宿主防御的免疫细胞。 它们的抗菌能力被临床上重要的细胞内病原体诸如结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)所破坏。 因此使用这些细胞进行宿主 - 病原体相互作用的研究具有相当大的意义。 这样的研究通常试图表达标记的蛋白质来表征它们的活性,定位和蛋白质 - 蛋白质相互作用。 在这里,我们描述了使用mRNA脂质复合物转染在巨噬细胞中瞬时蛋白质表达的稳健方法。

【背景】典型的实现蛋白质表达的方法,包括使用阳离子聚合物转染DNA,核转染和病毒转导(Zhang等人,2009)在巨噬细胞中特别困难,因为这些细胞具有对 各种危险信号如胞质DNA。 因此,用于外源基因递送的常规方法导致差的转染效率和细胞死亡。 我们推论,正如最近的报道(Van De Parre等人,2004; McLenachan等人,2004)所述,转染mRNA而不是DNA,将是实现巨噬细胞中蛋白质表达的更好的替代方案 。,2013)。 我们能够实现高转染效率而不损失巨噬细胞活力(Koster等人,2017)。 我们的方法不需要昂贵的设备,可以适应表达外源性和内源性蛋白质。

A Novel Protocol to Quantitatively Measure the Endocytic Trafficking of Amyloid Precursor Protein (APP) in Polarized Primary Neurons with Sub-cellular Resolution
Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract]  Alzheimer’s disease’s established primary trigger is β-amyloid (Aβ) (Mucke and Selkoe, 2012). The amyloid precursor protein (APP) endocytosis is required for Aβ generation at early endosomes (Rajendran and Annaert, 2012). APP retention at endosomes depends on its sorting for degradation in lysosomes (Haass et al., 1992; Morel et al., 2013; Edgar et al., 2015; Ubelmann et al., 2017). The following endocytosis assay has been optimized to assess the amyloid precursor protein (APP) endocytosis and degradation by live murine cortical primary neurons (Ubelmann et al., 2017). [摘要]  阿尔茨海默病确定的主要触发因素是β-淀粉样蛋白(Aβ)(Mucke和Selkoe,2012)。 淀粉样蛋白前体蛋白(APP)内吞作用是在早期内体中产生Aβ所必需的(Rajendran和Annaert,2012)。 内涵体上的APP保留取决于其对溶酶体中的降解的分选(Haass等人,1992; Morel等人,2013; Edgar等人, 2015年; Ubelmann等人,2017年)。 已经优化了以下内吞作用测定法以评估活的小鼠皮层原代神经元的淀粉状蛋白前体蛋白(APP)内吞作用和降解(Ubelmann等人,2017)。

【背景】Aβ42积聚是阿尔茨海默病的主要触发因素。 APP的胞吞作用需要Aβ42代(辜和Squazzo,1994; Grbovic 等人,2003; Cirrito 等人,2008;拉金德伦等人,2008)。已经通过表面蛋白的经典生物素化在脉冲追踪动力学实验中分析了APP的内吞作用(Sannerud等人,2011; Xiao等人,2012; Sullivan等人,2014),在单细胞中通过使用针对APP的N-末端胞外结构域的抗体(Yamazaki等人,1995; Xiao ,2012)。这些研究中的大多数使用非神经元细胞(Yamazaki等人,1996; Lee等人,2008; Sullivan等人, ...

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