| Live Cell Imaging of Male Meiosis in Arabidopsis by a Landmark-based System
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Author:
Date:
2020-05-05
[Abstract] Live cell imaging has tremendously promoted our understanding of cellular and subcellular processes such as cell division. Here, we present a step-by-step protocol for a robust and easy-to-use live cell imaging approach to study male meiosis in the plant Arabidopsis thaliana as recently established. Our method relies on the concomitant analysis of two reporter genes that highlight chromosome configurations and microtubule dynamics. In combination, these reporter genes allowed the discrimination of five cellular parameters: cell shape, microtubule array, nucleus position, nucleolus position, and chromatin condensation. These parameters can adopt different states, e.g., the nucleus position can be central or lateral. Analyzing how tightly these states are associated gives ...
[摘要] [摘要 ] 活细胞成像极大地促进了我们对细胞分裂等亚细胞过程的了解。在此，我们提出了一种循序渐进的方案，以一种可靠且易于使用的活细胞成像方法来研究雄性减数分裂。植物拟南芥。由于最近建立了我们的方法依赖于伴随分析中的两个报告基因，突出染色体构和微管动态组合，这些记者基因准许入住歧视五细胞参数：细胞形状，微管阵列，核POSITI 在，核仁位置，染色质凝聚，这些参数可以采用不同的国家，例如，该核位置可以是中央或外侧。分析如何紧密这些国家有关联产生了里程碑阶段，反过来允许定量和定性的解剖减数分裂过程我们设想，这种方法还可以为细胞分化分析提供有价值的标准 减数分裂之外的增强过程。
[背景 ] 减数分裂是一种特殊的细胞分裂周期，有两个主要目的：首先，减数分裂母细胞的DNA含量降低一半，在二倍体生物体中会导致单倍体减数分裂产物。有性繁殖的生物，以便在受精过程中融合了两个配子后，恢复了原始的基因组大小。其次，减数分裂通过亲本染色体（同源染色体或短同源）之间的DNA片段交换（称为减数分裂重组）促进了遗传多样性。通过生成新的但完整的染色体集，其中每个染色体随机存在母亲或父亲的同系物（如果是二倍体生物体）。因此，减数分裂对于不同领域的研究很有趣，从细胞生物学和生殖生物学，从遗传学到进化生物学（Wijn ker 和Schnittger ，2013； Mercier ...
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| FRAP: A Powerful Method to Evaluate Membrane Fluidity in Caenorhabditis elegans
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2018-07-05
[Abstract] FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching) is probably the most direct method to investigate the dynamics of molecules in living cells. Here, we describe FRAP to quantify membrane fluidity in C. elegans. Using FRAP, we have shown that cold, glucose and exogenous saturated fatty acids can decrease the fluidity of cellular membranes in certain mutants.
[摘要] FRAP（光漂白后的荧光恢复）可能是研究活细胞中分子动力学的最直接方法。 在这里，我们描述FRAP来量化 C中的膜流动性。线虫。 使用FRAP，我们已经表明冷，葡萄糖和外源饱和脂肪酸可以降低某些突变体中细胞膜的流动性。
【背景】生物膜，定义所有细胞的特征，主要由磷脂组成（Van Meer 等人，，2008）。存在于磷脂双层中的脂肪酸物质极大地影响其性质。例如，高饱和脂肪酸含量增加了膜的刚性，而高不饱和脂肪酸含量促进了流动性（Pilon，2016）。细胞膜的脂肪酸组成通常与膳食脂肪的组成明显相关，膳食脂肪可直接掺入磷脂中（Abbott et al。，2012; Dancy et al。，2015）。然而，考虑到饮食中存在广泛的变化，细胞必须具有调节机制，监测和调节膜组成并获得所需的膜性质，例如流动性，曲率，厚度，等等。使用FRAP对在肠道细胞中表达prenylated GFP的蠕虫，我们先前已经证明，缺乏PAQR-2（哺乳动物脂联素受体的同源物）的突变体在葡萄糖或富含饱和脂肪的饮食中培养时降低了膜流动性。酸（Svensk et al。，2016; Devkota et ...
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| Imaging the Pharynx to Measure the Uptake of Doxorubicin in Caenorhabditis elegans
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2017-05-20
[Abstract] Caenorhabditis elegans offers an array of advantages to investigate the roles of uptake transporters. Herein, an epifluorescent microscopy approach was developed to monitor the uptake of the autofluorescent anticancer drug, doxorubicin, into the pharynx of C. elegans by organic cation transporters.
[摘要] 秀丽隐杆线虫提供了一系列优势来调查摄取转运蛋白的作用。在这里，开发了荧光显微镜方法来监测自发荧光抗癌药物多柔比星进入C的咽部。有机阳离子转运蛋白。
背景 人类细胞具有超过450个溶质载体转运蛋白，其被认为有助于摄取几种离子，营养物质以及治疗和抗癌药物（Cesar-Razquin等人，2015）。然而，大量这些摄取转运蛋白的作用和底物是未知的。线虫是一种廉价的模型生物体，它比哺乳动物细胞提供了许多优点，可以快速研究许多高度保守的生物过程。在过去十年中，这种生物一直在几个药物发现计划中发挥作用，以鉴定新型小分子，例如，作为抗微生物剂和抑制氧化应激的小分子，尽管生物活性化合物的产量不太明显（Burns等人，2010; O'Reilly等人，，2014）。我们认为如果通过摄取转运蛋白进入动物细胞的分子更多和选择性地流入，则回收率可能更高。迄今为止，已经进行了三项研究以了解摄取转运蛋白在C中的作用。 elegans （Wu et al。，1999; Cheah等人，2013; Papaluca和Ramotar，2016）。因此，该生物体中摄取转运蛋白的功能和底物特异性的表征将有利于改进用于鉴定新生物活性分子的策略。在这里，我们概述了一种监测抗癌药物多柔比星摄入到C的咽中的方法。 elegans （Papaluca和Ramotar，2016）。多柔比星自发荧光可以通过几种广泛可用的检测系统如荧光显微镜来监测。我们注意到，从这种方法可以获得若干好处，包括通过竞争多柔比星摄取来寻找转运蛋白的新型治疗底物。 ...
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