| Optimize Highly Efficient Genetic Transformation Method of Spring Wheat (Triticum aestivum L.) Cultivars Using Mature Embryo
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Author:
Date:
2020-11-20
[Abstract] Genetic engineering is a powerful tool to develop desired traits in crop plants to make the crops suitable for future demand and changing environments. For the genetic engineering of wheat cultivars, the development of efficient transformation and regeneration systems has always been a primary requirement. Immature embryos have been used as explants for callus generation and genetic transformation of wheat cultivars, but the availability of healthy immature embryos as an explant throughout the year is difficult. In contrast, mature embryos are relatively easy to use throughout the year. The following protocol describes the genetic transformation of wheat cultivars using a mature embryo as explants by the Agrobacterium-mediated transformation method.
[摘要] [摘要]基因工程是开发农作物所需性状，使农作物适合未来需求和环境变化的有力工具。对于小麦品种的基因工程，开发高效的转化和再生系统一直是首要要求。未成熟的胚已被用作小麦品种的愈伤组织生成和遗传转化的外植体，但是全年都很难获得健康的未成熟胚作为外植体。相反，成熟的胚胎一年四季都相对容易使用。以下方案描述了使用小麦品种的遗传转化一个成熟胚由外植体的土壤杆菌介导的转化方法。
[背景]遗传转化是通过基因工程在小麦分子遗传学和改善使用的最重要的技术。微粒轰击和农杆菌介导的转化是小麦中遗传转化最广泛使用的两种方法（Vasil等，1992 ；Ding等，2009 ...
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| K+ Release Assay and K+ Measurement in Oocyte Assay
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Author:
Date:
2020-11-05
[Abstract] The Xenopus oocyte is a powerful system for the exogenous expression and functional characterization of plant membrane transport proteins. Until now, a number of potassium transporters and channels have been identified in oocytes expression system by the two-electrode voltage clamp technology. It is difficult to characterize K+/H+ anti-transporters, especially, electroneutral transporter. The K+ efflux assay system enables easy, fast, large-scale measurement of the transporters activity without two-electrode voltage clamp technology. This protocol describes a technique to measure the efflux activity of potassium transporter in oocytes expressing system.
[摘要] [摘要]爪蟾卵母细胞是针对外源表达和植物膜转运蛋白的功能表征一个强大的系统。迄今为止，通过两电极电压钳技术已经在卵母细胞表达系统中发现了许多钾转运蛋白和钾通道。很难表征K + / H +反转运蛋白，尤其是电中性转运蛋白。K +外排测定系统无需两电极电压钳技术即可轻松，快速，大规模地测量转运蛋白的活性。该协议描述了一种测量卵母细胞表达系统中钾转运蛋白外排活性的技术。
[背景[非洲爪蟾卵母细胞中积累了酶，蛋白质和细胞器，这些都可以被利用来生产大量，正确翻译后修饰，正确定点的外来蛋白质（Miller and Zhou，2000）。因此，卵母细胞通过使用两电极电压钳技术提供了一种有效的表达系统，以功能上表征植物膜蛋白。在卵母细胞中表达的第一个植物钾转运蛋白是K +通道（Cao等，1992）。此后，大部分钾通道和转运已经在卵母细胞的研究（Schachtman等人，1994; V é RY等人，1994; Wang和吴，2013年）。但是一些K + / H +反转运蛋白是电中性的，两电极电压钳技术无法表征这些转运蛋白。为了克服这个问题，我们采用了一种新的方法来确定这些转运蛋白的活性，方法是测量孵育前后培养基中钾含量的变化。细胞内ķ +浓度为约70 - 150mM的（韦伯，1999年）。由表达的K +转运蛋白介导的K +外排可引起细胞内和细胞外K ...
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| Efficient Agrobacterium-mediated Transformation of the Elite–Indica Rice Variety Komboka
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Author:
Van T. Luu, Melissa Stiebner, Paula Emmerich Maldonado, Sandra Valdés, Didier Marín, Gerardo Delgado, Virginia Laluz, Lin-Bo Wu, Paul Chavarriaga, Joe Tohme, Inez H. Slamet-Loedin and Wolf B. Frommer,
Date:
2020-09-05
[Abstract] Genetic transformation is crucial for both investigating gene functions and for engineering of crops to introduce new traits. Rice (Oryza sativa L.) is an important model in plant research, since it is the staple food for more than half of the world’s population. As a result, numerous transformation methods have been developed for both indica and japonica rice. Since breeders continuously develop new rice varieties, transformation protocols have to be adapted for each new variety. Here we provide an optimized transformation protocol with detailed tips and tricks for a new African variety Komboka using immature embryos. In Komboka, we obtained an apparent transformation rate of up to 48% for GUS/GFP reporter gene constructs using this optimized protocol. This ...
[摘要]
[摘要 ] 遗传转化对于研究基因功能和农作物工程引入新性状均至关重要。水稻（Oryza sativa L.）是植物研究中的重要模型，因为它是世界一半以上人口的主食。其结果是，大量的转化方法已经开发了两个籼稻和粳稻米。由于育种者不断开发新的水稻品种，因此必须针对每个新品种适应转化方案。在这里，我们为使用未成熟胚的非洲新品种Komboka 提供了一种优化的转化协议，包括详细的技巧和窍门。在Komboka中，我们使用此优化方案对GUS / GFP报告基因构建体的表观转化率高达48％。该协议也适用于其他优质lite 稻品种。
[背景 ] 为植物的遗传转化的各种方法公顷一直在开发，例如穿孔（Shimamoto PEG介导的原生质体转染。等人，1989;达塔。等人，1992），生物射弹转化（Christou的等人，1991）和农杆菌-介导的转化（Slamet-Loedin 等，2014）。农杆菌介导的转化是将DNA引入植物的最广泛使用的方法之一（van Wordragen and Dons，1992）。该方法已被广泛用于研究，并已成为生物技术的关键先决条件。自从开发新的育种技术（如基因组编辑）以来，它就变得越来越重要（Char ...
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