| Direct Visualization of the Multicopy Chromosomes in Cyanobacterium Synechococcus elongatus PCC 7942
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Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] Cyanobacteria are prokaryotic organisms that carry out oxygenic photosynthesis. The fresh water cyanobacterium Synechococcus elongatus PCC 7942 is a model organism for the study of photosynthesis and gene regulation, and for biotechnological applications. Besides several freshwater cyanobacteria, S. elongatus 7942 also contains multiple chromosomal copies per cell at all stages of its cell cycle. Here, we describe a method for the direct visualization of multicopy chromosomes in S. elongatus 7942 by fluorescence in situ hybridization (FISH).
[摘要] 蓝细菌是进行含氧光合作用的原核生物。 淡水蓝藻 Synechococcus elongatus PCC 7942是用于研究光合作用和基因调控以及生物技术应用的模式生物。 除了几种淡水蓝藻， S. 细胞 7942在其细胞周期的所有阶段每个细胞还含有多个染色体拷贝。 在这里，我们描述了一种直接可视化 S中多拷贝染色体的方法。 通过荧光原位杂交（FISH）测定细菌 7942。
【背景】蓝藻是原核微生物，其利用与高等植物中的叶绿体类似的产氧光合系统。虽然 Escherichia coli 和枯草芽孢杆菌等细菌具有单个圆形染色体，但是几种淡水蓝细菌每个细胞有多个圆形染色体（Mann和Carr，1974; Labarre 等人，1989; Binder和Chisholm，1995）。淡水蓝藻 Synechococcus elongatus PCC 7942（以下简称 S.longatus 7942）每个细胞携带3-8个染色体拷贝（Griese et al。，2011; Watanabe et al。，2012; Watanabe et al。，2015）。已经建立了荧光报告子 - 操纵子系统来获取 S的多拷贝染色体的图像。 elongatus 7942（Chen et al。，2012; Jain et ...
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| Protocol for Notch-ligand Binding Assays Using Dynabeads
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Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract] This protocol describes how to measure interaction between Notch receptors and their ligands by cell-based assay using Dynabeads. We have used the protocol to determine binding capacity between Notch1-transfected HEK293T cells and ligand-coated Dynabeads. Expression of Eogt in Notch1-expressing cells promoted binding toward DLL4-coated beads, but not JAG1-coated beads. The Notch-ligand assay using Dynabeads suggested that Eogt facilitates DLL4-Notch1 interaction (Sawaguchi et al., 2017).
[摘要] 该协议描述了如何使用Dynabeads通过基于细胞的测定来测量Notch受体及其配体之间的相互作用。 我们已经使用方案来确定Notch1转染的HEK293T细胞和配体包被的Dynabeads之间的结合能力。 在Notch1表达细胞中表达Eogt 促进了对DLL4包被的珠粒的结合，而不是JAG1包被的珠粒。 使用Dynabeads的Notch-配体测定表明，Eogt 有助于DLL4-Notch1相互作用（Sawaguchi等人，2017）。
【背景】Notch信号通路调节许多类型的细胞事件，如所有后生动物中的增殖，细胞命运测定和细胞分化（Mumm和Kopan，2000）。为了启动Notch信号传导，Notch受体的细胞外结构域与其配体结合，呈现在相对细胞上的Delta样（DLL）配体或Jagged（JAG）配体）。
Notch受体的表皮生长因子（EGF）样结构域对配体结合至关重要，并由包含O-岩藻糖，O-葡萄糖和O-GlcNAc聚糖的特定聚糖修饰（Stanley和Okajima，2010）。这些聚糖中的一些通过调节Notch受体和配体之间的物理相互作用（Moloney等人，2000）用作Notch信号传导途径的调节剂。为了研究O-GlcNAc是否调节Notch-配体相互作用，我们开发了一种基于Dynabeads的Notch-配体结合测定。在该测定中，在HEK293T细胞上表达的Notch受体与用DLL4-Fc或JAG1-Fc包被的Dynabeads蛋白A孵育。与用于其他结合测定法的可溶性配体不同，Notch配体的方向固定在珠上，使得它们表现得像配体表达细胞。因此，检测到的结合表示反式结合而不是顺式结合，当Notch受体及其配体在相同的细胞中表达时发生。该测定表明，通过Eogt ...
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