| Small Molecule-Based Retinal Differentiation of Human Embryonic Stem Cells and Induced Pluripotent Stem Cells
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Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract] Retinal degeneration leads to loss of light-sensing photoreceptors eventually resulting in vision impairment and impose a heavy burden on both patients and the society. Currently available treatment options are very limited and mainly palliative. Ever since the discovery of human pluripotent stem cell technologies, cell replacement therapy has become a promising therapeutic strategy for these patients and may help restore visual function. Reproducibly generating enriched retinal cells including retinal progenitors and differentiated retinal neurons such as photoreceptors using human embryonic stem (ES) cells and induced pluripotent stem (iPS) cells in a dish is an essential first step for developing stem cell-based therapies. In addition, this will provide a reliable and sufficient supply ...
[摘要] 视网膜变性导致光感受器丧失，最终导致视力损害，并给患者和社会带来沉重的负担。目前可用的治疗方案非常有限，主要是姑息治疗。自从人类多能干细胞技术的发现以来，细胞替代疗法已成为这些患者的有希望的治疗策略，并可能有助于恢复视觉功能。使用人类胚胎干（ES）细胞和诱导多能干（iPS）细胞在培养皿中重现性地产生包括视网膜祖细胞和分化的视网膜神经元（例如光感受器）的富集视网膜细胞是开发基于干细胞的治疗的重要的第一步。此外，这将为研究疾病机制提供可靠和充足的人类视网膜细胞供应。在这里，我们描述了一种小分子视网膜诱导协议，已被用于生成视网膜祖细胞和分化的视网膜神经元，包括来自几个人ES和iPS细胞系的光感受器。通过该方案产生的视网膜细胞可以在视网膜下移植后的几个月内存活并且功能性地整合到正常和患病的小鼠视网膜中。
【背景】世界各地的一些团体正在开发用于从人多能干细胞产生特定细胞类型的方法。这些细胞可能在再生医学的未来作为替代细胞的来源中发挥关键作用。这些新产生的人类细胞在开发更好和更准确的人类疾病模型中非常有用，然后可用于发现具有更好功效和安全性的新药。
我们的工作重点是影响全球数百万人的视网膜退行性疾病，如黄斑变性和视网膜色素变性。视网膜中光感受器的死亡通常与这些疾病相关，并导致严重损伤或全部视力丧失。没有有效的药物治疗可以治愈这些疾病。
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| DQ-Red BSA Trafficking Assay in Cultured Cells to Assess Cargo Delivery to Lysosomes
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Author:
Date:
2017-10-05
[Abstract] Lysosomes are the terminal end of the endocytic pathway having acidic environment required for active hydrolases that degrade the cargo delivered to these compartments. This process of cargo delivery and degradation by endo-lysosomes is a tightly regulated process and important for maintaining cellular homeostasis. Cargos like EGF (Epidermal Growth Factor), Dil-LDL (3,3’-Dioctadecylindocarbocyanine-Low Density Lipoprotein), Dextran, DQ-BSA (Dye Quenched-Bovine Serum Albumin) etc., are routinely used by researchers to analyze the role of various proteins in endocytic pathway. Trafficking of DQ-BSA in cells depleted of or over-expressing the gene of interest is a useful assay for identifying the role of various proteins in endocytic trafficking pathway. The protocol describes the ...
[摘要] 溶酶体是具有降解递送到这些隔室的货物的活性水解酶所需的酸性环境的内吞途径的末端。 这种内溶溶酶体的货物递送和降解过程是一个严格调节的过程，对于维持细胞体内平衡是重要的。 Cargos如EGF（表皮生长因子），Dil-LDL（3,3'-二十八碳基碳代花青 - 低密度脂蛋白），葡聚糖，DQ-BSA（染料淬灭 - 牛血清白蛋白）等常规 由研究人员用来分析各种蛋白质在内吞途径中的作用。 在缺乏或过表达感兴趣的基因的细胞中的DQ-BSA的贩运是用于鉴定各种蛋白质在内吞运输途径中的作用的有用测定。 该方案描述了可用于研究各种细胞类型的吞噬运输的DQ-Red BSA运输测定。
【背景】细胞不断地与其细胞外环境交换物质，并且在这个过程中，它们将货物内部化在质膜的囊泡中。这种内部货物被运送到早期的内体，从那里它可以通过再循环内体回到质膜或进入规范的内吞途径。一旦被注定要退化，货物就会移动到后期的内体，并最终与溶酶体融合，其中活性水解酶消化货物（Jovic等人，2010）。这些内吞室具有其内腔的特征pH。早期内体体内的pH值范围为5.9-6.8，晚期内体的pH范围为4.9-6.0，溶酶体最为酸性，pH范围为4.5-5.0（Maxfield和Yamashiro，1987）。溶酶体的酸性环境对于存在于其管腔中的水解酶和货物降解的活性是必需的（Garg等人，2011; ...
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