| Rapid Generation of Human Neuronal Cell Models Enabling Inducible Expression of Proteins-of-interest for Functional Studies
|
|
Author:
Date:
2020-05-05
[Abstract] CRISPR-Cas9 technology has transformed the ability to edit genomic sequences and control gene expression with unprecedented ease and scale. However, precise genomic insertions of coding sequences using this technology remain time-consuming and inefficient because they require introducing adjacent single-strand cuts through Cas9 nickase action and invoking the host-encoded homology-directed repair program through the concomitant introduction of large repair templates. Here, we present a system for the rapid study of any protein-of-interest in two neuronal cell models following its inducible expression from the human AAVS1 safe harbor locus. With lox-flanked foundation cassettes in the AAVS1 site and a tailor-made plasmid for accepting coding sequences-of-interest in ...
[摘要] [摘要] CRISPR-Cas9技术以前所未有的简便性和规模改变了编辑基因组序列和控制基因表达的能力。但是，由于需要引入相邻的单链，因此使用该技术进行精确的基因组编码插入仍然很耗时且效率低下。通过减少Cas9切口酶的作用并通过同时引入大型修复模板来调用宿主编码的同源性指导的修复程序。在此，我们提出了一种系统，用于在其诱导后的两个神经元细胞模型中快速研究任何目的蛋白该系统可从人类AAVS1 安全港基因座表达，在AAVS1 位点具有lox侧翼的基础盒和定制的质粒以接受感兴趣的编码序列，该系统使研究人员能够为诱导型产生自己的神经元细胞模型任何编码表达序列不到一个月的时间。由于可用性Preinserted 增强型绿色的Fluo 可以与目标蛋白质融合的最新蛋白质（EGFP）编码序列，该系统可帮助功能研究通过活细胞显微镜以及利用非常有效的可用性进行的相互作用组分析来跟踪目标蛋白质EGFP捕获矩阵。
[背景] ...
|
|
|
| Uptake Assays to Monitor Anthracyclines Entry into Mammalian Cells
|
|
Author:
Date:
2017-09-20
[Abstract] Anthracyclines, such as doxorubicin and daunorubicin, are DNA damaging agents that autofluoresce and can be readily detected in cells. Herein, we developed suitable assays to quantify and localize daunorubicin in mammalian cells. These assays can be exploited to identify components that are involved in the uptake of anthracyclines.
[摘要] 蒽环类药物，如多柔比星和柔红霉素，是DNA损伤剂，其可自发荧光并且可以容易地在细胞中检测到。 在这里，我们开发了合适的测定法来定量和定位哺乳动物细胞中的柔红霉素。 可以利用这些测定来鉴定参与蒽环类药物吸收的成分。
【背景】蒽环类药物，如多柔比星和柔红霉素，通过损伤DNA起作用，用于治疗各种类型的癌症，包括急性骨髓性白血病。当癌症患者被系统地给予蒽环类抗生素时，有几个因素限制了到达肿瘤部位的药物的量（Chauncey，2001; Deng等，2014; Riganti等，2015）。在肿瘤中，对癌细胞的药物活性受到药物吸收不良，药物流出过量以及细胞靶标变化的限制。几十年来，这些DNA损伤剂如何进入癌细胞还不清楚（Aouida等，2010; Cesar-Razquin等，2015; Zhang等，2015）。为了解决这个问题，我们开发了三种可靠的体外测定法来监测柔红霉素在细胞中的积累。这些测定中的两个是定量的，需要获得荧光活化细胞分选（FACS）口径和Fluoroskan仪器，第三个是使用落射荧光显微镜进行半定量。使用这些测定法，我们确定柔红霉素以时间和浓度依赖的方式进入细胞，并且每种细胞类型显示不同的摄取速率，这表明活性过程参与蒽环类药物的摄入（Andreev等人， ...
|
|
|