| Sterol Analysis in Kluyveromyces lactis
|
|
Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] Sterols are essential lipids of most eukaryotic cells with multiple functions (structural, regulatory and developmental). Sterol profile of yeast cells is often determined during the studies of ergosterol synthesis mutants used to uncover a number of functions for various sterols in yeast cells. Molecular studies of ergosterol biosynthesis have been also employed to identify essential steps in the pathway against which antifungals might be developed. We present here a protocol for the isolation of non-saponifiable lipids (sterols) from Kluyveromyces lactis yeast cells and a chromatographic method for quantitative analysis of sterols in lipid extracts (HPLC) that can be performed in laboratories with standard equipment.
[摘要] 甾醇是具有多种功能（结构，调节和发育）的大多数真核细胞的必需脂质。 在用于揭示酵母细胞中各种甾醇的许多功能的麦角甾醇合成突变体的研究期间，酵母细胞的甾醇分布通常被确定。 麦角甾醇生物合成的分子研究也被用于鉴定可能开发抗真菌剂途径的基本步骤。 我们在这里介绍从乳酸克鲁维酵母酵母细胞中分离不皂化脂质（甾醇）的方案和用于在实验室中用标准设备进行的脂质提取物（HPLC）中固醇的定量分析的色谱法。
【背景】在酵母细胞中发现的主要膜固醇的麦角固醇在哺乳动物系统中与胆固醇相似的细胞膜中起着结构的作用。通过影响膜的刚性，流动性和渗透性，甾醇已被证明对膜的许多重要物理特征负责。通过它们与磷脂和鞘脂的相互作用，提出甾醇以维持蛋白质的侧向异质性和质膜中的脂质分布，因为它们在诱导称为脂筏的微区域中的推定作用（Dupont等人，2011; Souza等， 2011）。酵母中的甾醇生物合成是一种能量昂贵的多步需氧过程，需要血红素和分子氧。谷歌甾醇及其生物合成步骤是对宿主生物体胆固醇合成影响较小的抗真菌化合物的主要目标（Daum等，1998）。麦角甾醇及其一些生物合成中间体（角鲨烯，7-脱氢胆固醇）均属于直接吸引人的化学物质。因此，用于甾醇分离的简单可靠的方法是非常有益的（Valachovic和Hapala，2017）。在该方案中，我们描述了用于测定酵母细胞中甾醇分布的固醇分离的分析方法。
|
|
|
| Extraction and Quantification of GABA and Glutamate from Cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803
|
|
Author:
Date:
2016-09-20
[Abstract] GABA (γ-amino butyric acid) is a biologically active four carbon non-protein amino acid found in prokaryotes and eukaryotes. Glutamate is a five carbon α-amino acid which can be converted to GABA catalyzed by the enzyme glutamate decarboxylase. In this protocol, we describe the procedure for extraction and quantification of GABA and glutamate from cells of the cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 (hereafter Synechocystis). Apart from Synechocystis, this protocol has already been successfully tested for the cyanobacterium Nostoc punctiforme and for the green alga Tetraspora sp. CU2551. The protocol can also be used for the analyses of other primary amino acids. We have successfully employed this protocol in our studies of GABA and glutamate ...
[摘要] GABA（γ-氨基丁酸）是在原核生物和真核生物中发现的生物活性四碳非蛋白质氨基酸。谷氨酸是一种五碳α-氨基酸，其可以被谷氨酸脱羧酶催化转化为GABA。在该协议中，我们描述了从蓝细菌集胞藻的细胞中提取和定量GABA和谷氨酸的程序。 PCC 6803（以下称为"集胞藻"）。除了集胞藻 ，该协议已经成功地测试了蓝细菌点状念珠菌 和绿藻 Tetraspora CU2551。该方案也可用于其他一级氨基酸的分析。我们已经在我们的集胞藻中的GABA和谷氨酸分析研究中成功地使用该方案（Kanwal和Incharoensakdi，2016）。
[背景] 酸分析先前已通过使用许多方法进行，包括使用薄层色谱或离子交换分离偶联的后柱衍生化与茚三酮方法或也使用HPLC通过荧光检测的检测。然而，在那些检测方法中遇到几个挑战，例如差的灵敏度，衍生物的降解，多重衍生物的形成和更长的保留时间，导致更高的溶剂消耗。此外，由于氨基酸的光学非活性，不能单独使用UV检测方法。
在这里我们描述了提取和分析氨基酸如GABA和谷氨酸在集胞藻中的详细程序。用于氨基酸分离和检测的方法是高性能反相液相色谱，随后是从Henderson等人采用的氨基酸的前柱OPA（邻苯二甲醛）衍生化的UV检测。 ...
|
|
|